【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药检测，具体涉及一种半夏与水半夏的uplc-q/tof-ms鉴别方法。
技术介绍
1、半夏为天南星科植物半夏pinellia ternata(thunb.) breit.的干燥块茎，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结的功效，半夏的活性成分主要包括生物碱、有机酸、挥发油、甾醇类、半夏蛋白、氨基酸、无机元素等。半夏是很多中成药的制备原料，水半夏为天南星科植物鞭檐犁头尖typhonium flagelliforme(lodd.)blume的干燥块茎，水半夏性味气微，味辛辣，麻舌而刺喉，内服多用于治疗呼吸道疾病，如止咳化痰等。由于半夏与水半夏存在价格上的差异，导致部分药材市场使用水半夏替代半夏，市场上的半夏与水半夏混用严重。半夏常见的入药形式不但有半夏原料，还有姜半夏、清半夏和法半夏炮制品，其中，法半夏在炮制过程中加入石灰水、甘草汁，清半夏在炮制过程中加入白矾，这2种炮制品在性状上可以很明显与前二者区分开，而姜半夏与半夏药材在性状上并无明显差异，对半夏与水半夏以及对相应的姜半夏炮制品的鉴别进行研究，对于半夏的质量控制具有重要意义。
2、目前，半夏和水半夏大部分鉴别方法是通过测定某单一成分对二者进行鉴别，这种方法无法解决半夏部分掺伪问题，且鉴定单一成分的方法容易受到偏离样品的干扰，影响鉴定结果的准确性。cn117368340a公开了基于lc-q-tof的姜半夏中掺伪姜水半夏的鉴定方法，该方法适用于姜半夏和姜水半夏的鉴别，并不能用于半夏和水半夏原料的鉴别。
3、基于此，建立一种全面、有效区分半夏、水半夏
技术实现思路
1、针对现有技术的不足之处，本专利技术的目的在于提供一种半夏与水半夏的uplc-q/tof-ms鉴别方法，该方法能够实现半夏和水半夏鉴别，同时适用于姜半夏和姜水半夏的鉴别，能够用于半夏或姜半夏部分掺伪的鉴别。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术提供一种半夏与水半夏的uplc-q/tof-ms鉴别方法，包括以下步骤：
4、s1、取半夏、姜半夏、水半夏和姜水半夏分别制备供试品溶液；取α-亚麻酸、松香酸、橙皮苷、苍术素、精氨酸、腺苷、鸟苷、尿苷、葫芦巴碱、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二辛酯制备混合对照品溶液；
5、s2、将s1制备的半夏、姜半夏、水半夏和姜水半夏供试品溶液，分别采用超高效液相色谱分离和高分辨质谱检测，采用正离子mse扫描模式，获得正离子模式下半夏、姜半夏、水半夏和姜水半夏质谱数据，基于质谱数据找出半夏和水半夏的差异性成分；
6、s3、将s1制备的供试品溶液和混合对照品溶液采用超高效液相色谱分离和高分辨质谱检测，采用正离子mse扫描模式，获得正离子模式下的质谱基峰色谱图离子流图，采集的uplc-q/tof-ms数据利用unifi portal软件提取化合物信息，根据化合物的保留时间、准确分子离子峰和二级质谱信息，对所检测的供试品溶液成分进行分析及鉴定；
7、s4、利用progenesis qi软件结合多元统计学方法，对s2找出的差异性成分进行鉴定，确定半夏与水半夏的差异性成分为精氨酸、葫芦巴碱、尿苷、反式对羟基桂皮酸、苯丙氨酸、缬色脯甘脯肽、半夏胺b、半夏胺a、亚油酸乙醇酰胺、亚油酸-1-单甘油酯、亚油酸和α-棕榈精；
8、s5、对s4确定的差异性成分通过箱线图分析、热图分析和相关性分析比较，确定半夏、姜半夏、水半夏和姜水半夏鉴别的关键性化合物，所述关键性化合物为半夏胺a、半夏胺b、精氨酸、缬色脯甘脯肽和葫芦巴碱，利用s3检测的上述关键性化合物的半定量数据采用simca-p 14.1软件建立半夏和水半夏的opls-da分析模型；
9、s6、取待鉴定的样品，按照s1的方法制备供试品溶液，采用超高效液相色谱分离和高分辨质谱检测，获得正离子模式下的质谱基峰色谱图离子流图，采集s5中关键性化合物的质谱信息；
10、s7、将s6中采集的关键性化合物的质谱信息导入s5中的opls-da分析模型进行鉴定。
11、进一步地，s1中，所述供试品溶液的制备方法为，取样品于60℃烘10h，粉碎，过四号筛，精密称取样品粉末置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇，称重，超声提取30min，取出放冷，以50%甲醇补足减失的重量，摇匀，4000rpm离心10min，取上清液过0.22μm微孔滤膜，即得。
12、进一步地，s1所述混合对照品的制备方法为，取α-亚麻酸、松香酸、橙皮苷、苍术素、精氨酸、腺苷、鸟苷、尿苷、葫芦巴碱、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二辛酯，分别置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成对照品母液；分别精密吸取上述对照品母液各100μl置同一10ml量瓶中，摇匀，加入50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液，过0.22μm微孔滤膜，即得。
13、进一步地，s2中，找出半夏和水半夏的差异性成分的具体方法包括：
14、s21、将正离子模式下采集的半夏、水半夏、姜半夏和姜水半夏的质谱数据分别导入progenesis qi软件，对采集得到的谱图进行峰标准化、峰提取、峰对齐、峰匹配校正，得到包含化合物保留时间和质荷比信息；
15、s22、将所有的化合物数据导入ezinfo 3.0软件得到.txt文件；
16、s23、将得到的.txt文件导入simca-p 14.1软件进行多元统计学分析，包括主成分分析法和正交偏最小二乘法-判别分析法对半夏、姜半夏，水半夏、姜水半夏样品进行区分，以vip＞1且p＜0.05作为差异成分的筛选条件筛选出存在显著性差异的化合物。
17、进一步地，s3中，对所检测的供试品溶液成分进行分析及鉴定的具体方法包括：
18、s31、采用超高效液相色谱分离和高分辨质谱检测分别对混合对照品溶液和半夏、水半夏供试品溶液进行正离子mse扫描，获得正离子模式下的质谱基峰色谱图离子流图；
19、s32、利用traditionl tcm数据库进行筛查，得到质谱数据分析结果，通过化合物裂解规律以及相关化合物质谱数据对软件给出化合物列表进行鉴定，最终共鉴定出41个化合物。
20、进一步地，s2和s3中超高效液相色谱分离和高分辨质谱检测采用的色谱条件为：
21、液相色谱柱：waters acquity uplc beh c18，2.1mm×100mm×1.7μm；
22、流动相：乙腈为流动相a，0.1%甲酸水溶液为流动相b，采用的梯度洗脱程序为：0～1min，5%a；1～8min，5%～24%a；8～16min，24%～48%a；16～25min，48%～78%a；25～30min，78%～100%a；
23、柱温：40℃；
24、流速：0.3ml/min；
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1.一种半夏与水半夏的UPLC-Q/TOF-MS鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种半夏与水半夏的UPLC-Q/TOF-MS鉴别方法，其特征在于，S1中，所述供试品溶液的制备方法为，取样品于60℃烘10h，粉碎，过四号筛，精密称取样品粉末置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇，称重，超声提取30min，取出放冷，以50%甲醇补足减失的重量，摇匀，4000rpm离心10min，取上清液过0.22μm微孔滤膜，即得。
3.根据权利要求1所述的一种半夏与水半夏的UPLC-Q/TOF-MS鉴别方法，其特征在于，S1所述混合对照品的制备方法为，取α-亚麻酸、松香酸、橙皮苷、苍术素、精氨酸、腺苷、鸟苷、尿苷、葫芦巴碱、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二辛酯，分别置10mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成对照品母液；分别精密吸取上述对照品母液各100μL置同一10mL量瓶中，摇匀，加入50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液，过0.22μm微孔滤膜，即得。
4.根据权利要求1所述的一种半夏与水半夏的UPLC-
5.根据权利要求1所述的一种半夏与水半夏的UPLC-Q/TOF-MS鉴别方法，其特征在于，S3中，对所检测的供试品溶液成分进行分析及鉴定的具体方法包括：
6.根据权利要求1所述的一种半夏与水半夏的UPLC-Q/TOF-MS鉴别方法，其特征在于，S2和S3中超高效液相色谱分离和高分辨质谱检测采用的色谱条件为：
7.根据权利要求1所述的一种半夏与水半夏的UPLC-Q/TOF-MS鉴别方法，其特征在于，S2和S3中超高效液相色谱分离和高分辨质谱检测采用的质谱条件为：
8.根据权利要求1所述的一种半夏与水半夏的UPLC-Q/TOF-MS鉴别方法，其特征在于，S4中所述多元统计学方法包括主成分分析法和正交偏最小二乘法-判别分析。
...【技术特征摘要】
1.一种半夏与水半夏的uplc-q/tof-ms鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种半夏与水半夏的uplc-q/tof-ms鉴别方法，其特征在于，s1中，所述供试品溶液的制备方法为，取样品于60℃烘10h，粉碎，过四号筛，精密称取样品粉末置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇，称重，超声提取30min，取出放冷，以50%甲醇补足减失的重量，摇匀，4000rpm离心10min，取上清液过0.22μm微孔滤膜，即得。
3.根据权利要求1所述的一种半夏与水半夏的uplc-q/tof-ms鉴别方法，其特征在于，s1所述混合对照品的制备方法为，取α-亚麻酸、松香酸、橙皮苷、苍术素、精氨酸、腺苷、鸟苷、尿苷、葫芦巴碱、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二辛酯，分别置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成对照品母液；分别精密吸取上述对照品母液各100μl置同一10ml量瓶中，摇匀，加入50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，制...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴毅，万林春，付辉政，张鹏，王峰，肖小武，吴秋云，
申请(专利权)人：江西省药品检验检测研究院，
类型：发明
国别省市：
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