【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生化分析领域，更具体地，涉及一种基于金属有机框架材料的纳米探针制备及多元检测应用。
技术介绍
1、三磷酸腺苷(atp)作为细胞能量传递的“货币分子单位”，是细胞代谢和生化过程的能量来源，参与多种细胞活动，被认为是细胞活力和损伤的重要化学信号剂。线粒体在产生atp的过程中，总会伴随着副产物活性氧(ros)的出现。过量的ros出现会攻击线粒体或者其他细胞器或细胞内其他物质，引发炎症或者使细胞直接凋亡。为了防止过量ros的致命作用，细胞会产生响应的还原物质来应对氧化应激。谷胱甘肽(gsh)是细胞抗氧化系统中最重要的抗氧化剂之一，可以保护细胞免受自由基或活性氧的侵害，在维持人体氧化还原稳态中发挥着重要作用。肿瘤细胞中已出现atp和gsh水平均升高的变化。鉴于atp和gsh之间的相互相关性，用于同时检测这两种活性分子以更好了解它们在疾病进展中的细胞水平变化具有重要意义。
2、常见的荧光纳米探针包括有机小分子荧光团、上转换纳米颗粒、碳点、量子点、聚集诱导发射(aie)荧光分子、金属有机框架(mof)等。它们具备灵敏度高、抗干扰能力强、响应快速、合成简易、低成本、无损伤等诸多优势。然而目前大部分报道的荧光纳米探针都只针对单gsh或单atp检测，同时定量这两种物质的荧光纳米探针少之又少。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种复合荧光纳米探针的制备，用于同时检测gsh和atp以及进行细胞内gsh和atp的荧光成像应用。
2、一方面，本专利技术提供了一种
3、其中，所述atp适配体所标记的荧光染料满足其荧光发射能被cu-mi-uio-66猝灭，且荧光发射峰不与cu-mi-uio-66重合，例如cy5、cy3、rox。
4、在上述制备方法中，cu-mi-uio-66呈八面体结构，与经典uio-66结构类似，但其有两点改进：1)马来酰亚胺基团修饰；2)掺入金属元素cu。
5、所述cu元素的掺入具体为：cu通过与uio-66中的-oh/-oh2配体与mof结合，覆盖了zr氧化物簇上的缺陷位点，形成cu-mi-uio-66。
6、在本专利技术复合荧光探针合成过程中cu的掺入降低了mi-uio-66的本体荧光，实现了更大的荧光开启效应，提高检测灵敏度。本专利技术所设计的复合荧光纳米探针具有双荧光发射的特性，可以互不干扰的检测gsh与atp。除此之外还可以实现gsh和atp细胞内荧光成像。
7、进一步的，所述h2l1的合成具体如下：
8、
9、进一步的，cu-mi-uio-66的制备具体如下：
10、将四氯化锆(zrcl4)、具有马来酰亚胺基团有机配体(h2l1)和硝酸铜加入dmf中，所得到的混合溶液中zrcl4、h2l1以及硝酸铜的最终浓度均为10～50mmol/l，完全溶解后加入适量酸性物质0.5～5ml，酸性物质包括但不限于乙酸、盐酸等，之后在120±20℃环境中反应4小时及其以上。最后离心洗涤真空干燥后得到浅绿色产物，即cu-mi-uio-66；
11、进一步的，当所述atp适配体所标记的荧光染料是cy5时，复合荧光纳米探针具体制备步骤如下：
12、标记cy5荧光染料的atp适配体序列为：
13、5'-acctgggggagtattgcggaggaaggt-3'，两端均可以标记cy5；
14、将100～240μg/ml的cu-mi-uio-6与10～200nm的标记cy5荧光染料的atp适配体序列混合，并在37℃下低速振荡不少于3min，后续离心去除上清液收集沉淀，形成复合荧光纳米探针cu-mi-uio-66/aptamer-cy5。
15、所述的复合荧光纳米探针中aptamer-cy5通过π-π堆积作用和静电吸附作用与mof材料结合。
16、复合荧光纳米探针cu-mi-uio-66/aptamer-cy5具有双荧光发射特性，分别是uio-66在320-390nm左右激发的蓝色荧光(400-600nm)和cy5在540-610nm左右激发的红色荧光(620-720nm)。
17、本专利技术合成的复合荧光纳米探针可以同时对gsh和atp产生响应。本专利技术合成的复合荧光纳米探针可以互不干扰的实现gsh和atp细胞内成像。
18、本专利技术合成的复合荧光纳米探针具有良好的细胞相容性，对细胞存活影响较小。
19、另一方面，本专利技术还公开了复合荧光纳米探针在gsh和atp同步检测方面和细胞内成像方面的应用。
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1.一种复合荧光纳米探针的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述ATP适配体所标记的荧光染料是Cy5或者Cy3或者ROX。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述具有马来酰亚胺基团有机配体的合成如下：
4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，所述Cu-Mi-UiO-66的制备如下：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述酸性物质是乙酸或者盐酸。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述ATP适配体所标记的荧光染料是Cy5，标记Cy5荧光染料的ATP适配体序列为：
7.采用权利要求1至6中任一项所述的制备方法合成的用于GSH和ATP同步检测的复合荧光纳米探针。
8.权利要求7所述的复合荧光纳米探针在GSH和ATP同步检测中的应用。
9.权利要求8所述的复合荧光纳米探针在细胞内成像中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种复合荧光纳米探针的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述atp适配体所标记的荧光染料是cy5或者cy3或者rox。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述具有马来酰亚胺基团有机配体的合成如下：
4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，所述cu-mi-uio-66的制备如下：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于...
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