【技术实现步骤摘要】
本申请涉及肿瘤基因治疗领域，具体地，本申请提供了一种治疗癌症的慢病毒及其制备方法和应用。
技术介绍
1、癌症每年夺去数百万人的生命，是人类最大的健康挑战之一，目前尚无有效防治手段。人类最早运用的三大武器：手术、放疗、化疗，到目前的分子靶向治疗、免疫治疗，治愈率低，费用高昂，病人所承受的痛苦和随之给病人身体造成的巨大副作用更是常人无法体会的。在科技发展日新月异的今天，癌症依然是一道世界性的难题。
2、在攻克癌症的道路上科学家们一直在孜孜不倦的努力着，2001年的诺贝尔生理学或医学奖表彰美国科学家lelandh.harwell及英国科学家timothyhunt和paulm.nurse在发现细胞周期的关键调控因子这一方面做出的杰出贡献。早在1983年timothyhunt以海胆卵为实验材料，发现在其卵裂过程中两种蛋白质的含量随细胞周期而变化,开创了这一理论研究的先河；2006年的诺贝尔生理学或医学奖表彰美国科学家在发现rna(核糖核酸)干扰机制方面做出的杰出贡献，源于1998年美国人安德鲁·法尔和克雷格·梅洛在《自然》杂志上发表的一项研究成果。这些重大发现为人类对生命的研究开辟了一个非常广阔的领域。研究表明，某些小rna分子能够通过引导基因打开或者关闭来决定某一个细胞的命运，这将会对引诱细胞形成某种特定类型的组织产生深远的影响。近年的研究发现，用这种方法可以导致相应蛋白质无法合成，从而“关闭”特定基因，控制细胞的增值。细胞分裂周期蛋白是人类dna复制起始物中必不可少的，它是dna复制和细胞增殖所必须的蛋白。人类dna的复制
3、慢病毒载体(lentivirus vector)是以hiv-1(人类免疫缺陷i型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。慢病毒既可侵染有丝分裂活跃期的细胞，又可侵染分裂缓慢及处于分裂终末期的细胞，包括造血干细胞、神经干细胞、处于分化终末的神经元、肝实质细胞等。在体外培养细胞实验和体内移植实验中，由慢病毒载体携带导入的目的基因可以得到长期而稳定的表达。此外，慢病毒载体不表达任何hiv-i蛋白，免疫原性低。经过改造后的慢病毒载体可以容纳约10kb左右的外源基因，因此大多数的cdna都能被克隆入慢病毒载体。这些优点使慢病毒载体成为体内和体外基因转移的一种有效工具。
技术实现思路
1、本专利是将人工合成的htert-cdc6shrna(碱基数1521bp)基因序列构建到慢病毒载体上。htert端粒酶是一种rna依赖性的dna聚合酶，其核心结构包含必要的rna结构，由逆转录活性的人端粒酶亚单位(human telomerase catalytic subunit,htert)和相关蛋白组成。htert启动子区域缺乏tata盒及caat盒，其结构是富含gc的cpg岛，转录起始位点上游181bp是核心启动子区，多个转录因子结合位点。在成熟分化的人类组织细胞中htert基因的表达处于关闭状态，在肿瘤细胞中该基因在转录水平上被激活。所以通过htert基因的启动子可以特异性地引导肿瘤基因只在肿瘤细胞中表达。癌细胞中含有大量正常细胞中所没有的cdc6蛋白，且癌细胞的细胞分裂越多，cdc6蛋白的含量越高。“cdc6shrna活性基因”的使用原理着眼于这种“癌症有无限增殖”的特性，它能消灭在普遍癌细胞里存在的一种被称为cdc6的dna的复制因子，敲低cdc6蛋白，使之有效地让癌细胞走向自我灭亡，并通过lentivirus vector对癌细胞进行高效渗透使原癌基因与发生突变、缺失或失活的抑癌基因恢复其正常的调节作用，癌细胞恢复为正常细胞，从而实现抑制肿瘤的目的。通过体外实验的结果，我们发现这种基因序列具有明显的抑癌效果。
2、一方面，本申请提供了一种治疗癌症的慢病毒，所述治疗癌症的慢病毒携带有htert启动子、cdc6shrna基因。
3、进一步地，所述htert启动子序列为seq id no.2。
4、进一步地，所述cdc6shrna基因序列为seq id no.3。
5、进一步地，所述慢病毒携带htert启动子-cdc6shrna组合基因。
6、进一步地，所述htert启动子-cdc6shrna组合基因序列为seq id no.1。
7、另一方面，本申请提供了上述治疗癌症的慢病毒在制备治疗癌症的药物中的应用。
8、进一步地，所述癌症为肺癌、肝癌、乳头状甲状腺癌、卵巢癌、肾透明细胞腺癌、胰腺癌、人子宫内膜腺癌。
9、进一步地，所述癌症为肺癌、肝癌、乳头状甲状腺癌。
10、进一步地，所述癌症为肺癌。
11、另一方面，本申请提供了药物组合物，所述药物组合物包含上述治疗癌症的慢病毒。
12、进一步地，所述药物组合物还包括药学上可接受的赋形剂。
13、进一步地，所述药物组合物为注射剂剂型。
14、另一方面，本申请提供了上述治疗癌症的慢病毒的制备方法:
15、(1)在载体的酶切位点后插入htert启动子、cdc6shrna基因序列获得质粒；
16、(2)将质粒转入表达菌株，培养筛选成功转入的菌株；
17、(3)对步骤(2)所得的成功转入的菌株进行摇菌，得到htert-cdc6shrna表达质粒；
18、(4)对步骤(3)所述表达质粒进行包装，得到htert-cdc6shrna慢病毒。
19、本领域技术人员可以根据药学领域一般知识为本申请所涉及的药物组合物选择适合的辅料，可用的辅料种类包括但不限于溶剂、助溶剂、稳定剂、分散剂、粘度调节剂、抗氧化剂、ph调节剂、缓释剂、填充剂、甜味剂、粘合剂、气体发生剂、包衣剂等。特别优选适合注射剂的辅料。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种治疗癌症的慢病毒，其特征在于，所述治疗癌症的慢病毒携带有hTERT启动子、CDC6shRNA基因。
2.根据权利要求1所述的慢病毒，其中所述hTERT启动子序列为SEQ ID NO.2。
3.根据权利要求1或2所述的慢病毒，其中所述CDC6shRNA基因序列为SEQ ID NO.3。
4.根据权利要求1所述的慢病毒，其中所述慢病毒携带hTERT启动子-CDC6shRNA组合基因。
5.根据权利要求4所述的慢病毒，其中所述hTERT启动子-CDC6shRNA组合基因序列为SEQ ID NO.1。
6.根据权利要求1-5任一项所述的慢病毒在制备治疗癌症的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其中所述癌症为肺癌、肝癌、乳头状甲状腺癌、卵巢癌、肾透明细胞腺癌、胰腺癌、人子宫内膜腺癌。
8.根据权利要求7所述的应用，其中所述癌症为肺癌、肝癌、乳头状甲状腺癌。
9.根据权利要求8所述的应用，其中所述癌症为肺癌。
10.药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含根据权利要
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述药物组合物还包括药学上可接受的赋形剂。
12.根据权利要求10或11所述的药物组合物，其中所述药物组合物为注射剂剂型。
13.根据权利要求1-5任一项所述的慢病毒的制备方法，其特征在于，所述方法包括:
...【技术特征摘要】
1.一种治疗癌症的慢病毒，其特征在于，所述治疗癌症的慢病毒携带有htert启动子、cdc6shrna基因。
2.根据权利要求1所述的慢病毒，其中所述htert启动子序列为seq id no.2。
3.根据权利要求1或2所述的慢病毒，其中所述cdc6shrna基因序列为seq id no.3。
4.根据权利要求1所述的慢病毒，其中所述慢病毒携带htert启动子-cdc6shrna组合基因。
5.根据权利要求4所述的慢病毒，其中所述htert启动子-cdc6shrna组合基因序列为seq id no.1。
6.根据权利要求1-5任一项所述的慢病毒在制备治疗癌症的药物中的应用。
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【专利技术属性】
技术研发人员：张力辉，荆淑清，
申请(专利权)人：青岛阿尔泰基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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