【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫，特别涉及一种磷酸铝佐剂及其制备方法。
技术介绍
1、接种疫苗是预防传染病的最重要的手段之一，佐剂是提高疫苗接种效果的基本成分，铝盐与抗原混合后注射入生物体内，能够诱导比单独施用抗原更多的抗体产生，铝盐佐剂沿用至今已经有90多年的历史。尽管新型佐剂飞速发展，但大部分处于试验阶段，由于经食品与药物管理局批准用于人疫苗的唯一佐剂是含铝佐剂，它们安全和有效使用的历史悠久，使得目前市面上铝佐剂的使用仍然占据很大一部分比例。
2、目前商品化的磷酸铝(aluminium phosphate,ap)佐剂粒径为3-4μm，等电点为ph5，在生理条件下带负电，是较好的阳离子蛋白吸附剂。研究表明，磷酸铝佐剂的免疫效果很大部分取决于佐剂对蛋白的吸附能力，不同的铝佐剂具有不同的颗粒大小、等电点和形态特征，这可能导致佐剂对抗原的亲和力和疫苗效力的差异。免疫优势可以通过减小铝佐剂颗粒的尺寸来实现，以产生更有效的佐剂刺激细胞和体液免疫反应。相比微米级(磷酸铝颗粒的尺寸为3-4μm)的铝佐剂，微纳尺寸(磷酸铝颗粒的尺寸为300nm-600nm)的铝佐剂颗粒更小，比表面积更大，与抗原的结合面积更大，生物相容性更好，可以提高人体的免疫应答，大幅降低佐剂的副作用。因此通过粒径调控生产不同粒径的磷酸铝佐剂是研究磷酸铝佐剂的重点。
3、但是微纳尺寸的磷酸铝佐剂的理化性质受制备条件的影响较大，制备工艺重复性较差。因此，本领域仍旧需要一种工艺稳定且操作简单便捷的方法，来实现微纳尺寸的磷酸铝佐剂的制备。
技
1、为了解决现有技术中存在的上述问题，本专利技术通过使用化学沉淀法制备微米级磷酸铝佐剂后，通过置换缓冲体系调节磷酸铝佐剂的粒径，专利技术了一种简单高效的调节磷酸铝佐剂的粒径的方法，以及制备微纳尺度范围内的磷酸铝佐剂的方法。
2、本专利技术第一方面提供了一种调节磷酸铝佐剂粒径的方法，所述方法包括将微米级磷酸铝采用如下任意一种方式进行重悬处理的操作：
3、1)采用cit缓冲体系作为重悬液时：
4、将微米级磷酸铝重悬在ph为6-8的cit缓冲体系中，使得磷酸铝佐剂中磷酸铝的粒径为400nm-430nm；
5、2)采用pb缓冲体系作为重悬液时：
6、将微米级磷酸铝重悬在ph为6.5-8的pb缓冲体系中，使得磷酸铝佐剂中磷酸铝的粒径为445nm-585nm；
7、3)采用tris缓冲体系作为重悬液时：
8、将微米级磷酸铝重悬在ph为7.8-8.2的tris缓冲体系中，使得磷酸铝佐剂中磷酸铝的粒径为420nm-460nm；
9、将微米级磷酸铝重悬在ph为6.0-7.5的tris缓冲体系中，使得磷酸铝佐剂中磷酸铝的粒径为3000nm-3500nm；
10、4)采用pbs缓冲体系作为重悬液时：
11、将微米级磷酸铝重悬在ph为6-6.5的pbs缓冲体系中，使得磷酸铝佐剂中磷酸铝的粒径为3300nm-4200nm；
12、将微米级磷酸铝重悬在ph为6.8-8的pbs缓冲体系中，使得磷酸铝佐剂中磷酸铝的粒径为2600nm-3300nm。
13、本专利技术第二方面提供了一种磷酸铝佐剂的制备方法，所述方法包括将微米级磷酸铝采用如下任意一种方式进行重悬处理的操作：
14、1)采用cit缓冲体系作为重悬液时：
15、将微米级磷酸铝重悬在ph为6-8的cit缓冲体系中，使得磷酸铝佐剂中的磷酸铝的粒径为400nm-430nm；
16、2)采用pb缓冲体系作为重悬液时：
17、将微米级磷酸铝重悬在ph为6.5-8的pb缓冲体系中，使得磷酸铝佐剂中的磷酸铝的粒径为445-585nm；
18、3)采用tris缓冲体系作为重悬液时：
19、将微米级磷酸铝重悬在ph为7.8-8.2的tris缓冲体系中，使得磷酸铝佐剂中的磷酸铝的粒径为420nm-460nm。
20、在一个优选的具体实施方式中，所述微米级磷酸铝采用化学沉淀法制备得到；
21、所述化学沉淀法制备微米级磷酸铝包括：将铝盐溶液和磷酸盐溶液按照p/al摩尔比为1：1的比例混合均匀获得初始磷酸铝佐剂后，再进行沉淀处理，收取沉淀即获得微米级磷酸铝沉淀物；
22、优选地，所述化学沉淀法制备微米级磷酸铝在60℃条件下操作；
23、优选地，所述铝盐为氯化铝、硫酸铝钾、硝酸铝中的至少一种；
24、优选地，所述磷酸盐为磷酸三钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸三钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中的至少一种。
25、在一个优选的具体实施方式中，所述重悬处理为：按照将微米级磷酸铝进行沉淀处理之前的体积与重悬液的体积比为1：(0.5-5)，优选为1：(1-3)，进一步优选为1：1的比例，将微米级磷酸铝沉淀物在重悬液中进行重悬。
26、在一个优选的具体实施方式中，所述磷酸铝佐剂的制备方法还包括：将微米级磷酸铝沉淀进行水洗之后再进行重悬的操作；
27、优选地，所述水洗为2-3次。
28、在一个优选的具体实施方式中，所述磷酸铝佐剂的制备方法还包括：将微米级磷酸铝沉淀进行杀菌处理之后再进行重悬的操作；
29、优选地，所述杀菌处理为臭氧杀菌、辐照杀菌、高温蒸汽灭菌中的任意一种。
30、在一个优选的具体实施方式中，所述cit缓冲体系即柠檬酸盐缓冲液；采用柠檬酸、柠檬酸钠和水配制而成，通过调整柠檬酸和柠檬酸钠的相对用量来调节cit缓冲体系的ph；
31、所述pb缓冲体系即磷酸二氢钠/磷酸氢二钠缓冲液；采用磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和水配制而成，通过调整磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的相对用量来调节pb缓冲体系的ph；
32、所述tris缓冲体系即tris-hcl缓冲液；采用tris、hcl和水配制而成，通过调整tris和hcl的相对用量来调节tris缓冲体系的ph；
33、所述pbs缓冲体系即磷酸缓冲盐溶液；采用磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠和水配制而成，通过调整磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的相对用量来调节pbs缓冲体系的ph。
34、本专利技术第三方面提供了根据本专利技术第二方面提供的磷酸铝佐剂的制备方法制备得到的磷酸铝佐剂。
35、在一个优选的具体实施方式中，当采用cit缓冲体系时，缓冲液的ph为6时，ap的粒径、电位和ph依次为405nm、-45.53mv、6.22；缓冲液的ph为6.5时，ap的粒径、电位和ph依次为403nm、-46.58mv、6.50；缓冲液的ph为7时，ap的粒径、电位和ph依次为426nm、-48.58mv、6.65；缓冲液的ph为7.5时，ap的粒径、电位和ph依次为417nm、-48.91mv、6.67；缓冲液的ph为8时，ap的粒径、电位和ph依次为409nm、-47.12mv、6.69；
36、当采用pb缓冲体系，缓冲液的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种调节磷酸铝佐剂粒径的方法，其特征在于，所述方法包括将微米级磷酸铝采用如下任意一种方式进行重悬处理的操作：
2.一种磷酸铝佐剂的制备方法，所述方法包括将微米级磷酸铝采用如下任意一种方式进行重悬处理的操作：
3.根据权利要求2所述的磷酸铝佐剂的制备方法，其特征在于：
4.根据权利要求2或3所述的磷酸铝佐剂的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的磷酸铝佐剂的制备方法，其特征在于：
6.根据权利要求5所述的磷酸铝佐剂的制备方法，其特征在于：
7.根据权利要求6所述的磷酸铝佐剂的制备方法，其特征在于：
8.权利要求2至7中任一项所述的磷酸铝佐剂的制备方法制备得到的磷酸铝佐剂。
9.根据权利要求8所述的磷酸铝佐剂，其特征在于：
10.含有权利要求8或9所述的磷酸铝佐剂的疫苗。
【技术特征摘要】
1.一种调节磷酸铝佐剂粒径的方法，其特征在于，所述方法包括将微米级磷酸铝采用如下任意一种方式进行重悬处理的操作：
2.一种磷酸铝佐剂的制备方法，所述方法包括将微米级磷酸铝采用如下任意一种方式进行重悬处理的操作：
3.根据权利要求2所述的磷酸铝佐剂的制备方法，其特征在于：
4.根据权利要求2或3所述的磷酸铝佐剂的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹全义，张淑雅，韩霞，乔曼，刘志磊，安有才，
申请(专利权)人：易慧生物技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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