一种合成甘氨酸甜菜碱的高抗盐绿僵菌菌株的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种合成甘氨酸甜菜碱的高抗盐绿僵菌菌株的构建方法及应用，属于菌株应用技术领域。该菌株的构建方法为：先将胆碱脱氢酶、甜菜碱醛脱氢酶编码基因导入表达载体中获得重组表达质粒，再将重组表达质粒转入原始绿僵菌中，经过卡那霉素筛选，PCR验证，即得。有益效果：本发明专利技术提出一种合成甘氨酸甜菜碱的高抗盐绿僵菌菌株构建方法，并提出该菌株在高盐环境中的防治害虫的应用。甘氨酸甜菜碱可以提高菌株对高盐环境和盐胁迫的应对能力，同时可以提高植物的抗干旱能力，在高盐环境下生存的能力及提高抗性。响应了国家政策，提高绿僵菌的应用范围，助力生物农药的快速发展。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于菌株应用，具体涉及一种合成甘氨酸甜菜碱的高抗盐绿僵菌菌株的构建方法及应用。

技术介绍

1、绿僵菌生产上主要用金龟绿僵菌变种的制剂来防治害虫，如地下害虫、蛀干害虫、桃小食心虫、椰心叶甲、飞蝗、甘蓝小菜蛾、菜青虫和番茄棉铃虫，以及小水体中的蚊幼虫孑孓等卫生性害虫。

2、甘氨酸甜菜碱在植物体内可以作为一种渗透调节物质，帮助植物细胞维持水分平衡，减轻干旱对植物的影响；对于植物的盐胁迫抗性，在高盐环境中，甘氨酸甜菜碱的积累可以帮助植物细胞维持稳定的渗透压，减少水分流失，从而减轻盐胁迫对植物的伤害。此外，植物体在长期进化过程中，衍生出一系列应对重金属离子污染的防御机制，其中甜菜碱可有效缓解植物所受到的毒害作用。在低温环境中，甘氨酸甜菜碱可以保护植物细胞膜的结构，减少因低温引起的细胞膜破裂和离子泄露，提高植物的低温抗性。胆碱脱氢酶是生物体内催化胆碱与乙酸反应产生甜菜碱的酶。

3、绿僵菌在高盐环境下生长速率会降低，孢子的形成和活力受到抑制，从而导致其在盐碱地的应用受到限制。然而如何构建高抗盐性能的绿僵菌菌株尚未有报道。

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【技术保护点】

1.一种合成甘氨酸甜菜碱的高抗盐绿僵菌菌株的构建方法，其特征在于，先将胆碱脱氢酶、甜菜碱醛脱氢酶编码基因导入表达载体中获得重组表达质粒，再将重组表达质粒转入原始绿僵菌中，经过卡那霉素筛选，PCR验证，即得；

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，胆碱脱氢酶编码基因的扩增引物包括betA-F、betA-R；甜菜碱醛脱氢酶编码基因的扩增引物包括betB-F和betB-R；所述betA-F、betA-R、betB-F、betB-R的序列如SEQ ID No：3～6所示。

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【技术特征摘要】

1.一种合成甘氨酸甜菜碱的高抗盐绿僵菌菌株的构建方法，其特征在于，先将胆碱脱氢酶、甜菜碱醛脱氢酶编码基因导入表达载体中获得重组表达质粒，再将重组表达质粒转入原始绿僵菌中，经过卡那霉素筛选，pcr验证，即得；

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，胆碱脱氢酶编码基因的扩增引物包括beta-f、beta-r；甜菜碱醛脱氢酶编码基因的扩增引物包括betb-f和betb-r；所述beta-f、beta-r、betb-f、betb-r的序列如seq id no：3～6所示。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中连接的体系为线性化载体1ul、插入片段6ul、5×ce multis buffer exnase multis 4ul、ddh2o 2ul。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中连接的反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔静，陈心如，王聪，何远瑞，
申请(专利权)人：安徽医科大学，
类型：发明
国别省市：