一种环状RNA的制备方法及用途技术

本发明专利技术提供了一种环状RNA的制备方法及用途，所述环状RNA制备降低了环状RNA的开环率，降低了环状RNA的损失，同时提高了产物的纯度，并且所述体外环化后的RNA分子能够有效转染至细胞中。本发明专利技术亦提供了上述用于制备环状RNA的制备方法以及用途。在一些实施方案中，与现有RNA环化方法相比，本发明专利技术的方法提高了产物纯度、降低了开环效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学和生物工程，具体来说，本专利技术涉及一种制备环状rna的的载体及其在蛋白表达中的应用。

技术介绍

1、环状rna(circrna)是一类由前体mrna反向剪接和选择性剪接形成的共价闭合的环型分子，没有游离末端。与线性的mrna不同，环状rna的结构特殊性使其在疫苗和核酸药物的开发中有着独特的优势，可用于设计和产生稳定形式的mrna。circrna的蛋白翻译必须使用一种非经典的启动机制，即不依赖5’-帽子的翻译启动。这种起始途径往往通过ires(内部核糖体进入位点)驱动，一种具有特殊二级结构的短rna片段。

2、ires最早于20世纪80年代末在脊髓灰质炎病毒(pv)和脑心肌炎病毒(emcv)基因组的5′-utr中首次被鉴定，这两种病毒都属于小核糖核酸病毒家族。由于大多数病毒基因组中可编码蛋白的资源有限，缺乏独立复制的特性，因此，它们依靠劫持宿主细胞机器进行复制和生存。而小核糖核酸病毒则通过称为自身特有的ires序列获得有效蛋白质合成的先决条件。目前，在小核糖核酸病毒中至少发现了五种不同类型的ires，每种类型的特点是具有本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种环状RNA的制备方法，其特征在于，步骤包括：通过载体进行体外转录制备前体RNA，前体RNA使用5mmol/L～12.5mmol/L工作浓度的NTP合成，得到的前体RNA分子进行环化，得到环状RNA；

2.根据权利要求1所述环状RNA的制备方法，其特征在于，所述IRES包含SEQ ID NO.1-66中任何一个的序列。

3.根据权利要求1所述环状RNA的制备方法，其特征在于，还包括环状RNA纯化。

4.根据权利要求3所述环状RNA的制备方法，其特征在于，环状RNA纯化的流动相的pH值范围为6～8，流动相包括EDTA。

<p>5.一种环状RN...

【技术特征摘要】

1.一种环状rna的制备方法，其特征在于，步骤包括：通过载体进行体外转录制备前体rna，前体rna使用5mmol/l～12.5mmol/l工作浓度的ntp合成，得到的前体rna分子进行环化，得到环状rna；

2.根据权利要求1所述环状rna的制备方法，其特征在于，所述ires包含seq id no.1-66中任何一个的序列。

3.根据权利要求1所述环状rna的制备方法，其特征在于，还包括环状rna纯化。

4.根据权利要求3所述环状rna的制备方法，其特征在于，环状rna纯化的流动相的ph值范围为6～8，流动相包括edta。

5.一种环状rna的制备方法，其特征在于，步骤包括：通过载体进行体外转录制备前体rna，得到的前体rna分子进行环化，得到的环状rna再进行纯化，环状rna纯化时流动相的ph值范围为6～8；

6.根据权利要求5所述环...

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，
申请(专利权)人：苏州慧疗生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：