一种含m3T非天然碱基的体外转录方法及其评价分析方法技术

本发明专利技术提供了一种含m3T非天然碱基的体外转录方法及其评价分析方法，涉及非天然碱基技术领域。本发明专利技术建立了含m3T非天然碱基的体外转录方法，所述体外转录方法利用T7RNA聚合酶催化，可以将m3T非天然碱基掺入至DNA模板中TPT3的对位，从而生成含m3T的RNA产物，实现短链和中长链RNA的定点修饰。本发明专利技术进一步针对m3T碱基建立了其体外转录产物保真度评价方法和m3T非天然碱基体外转录序列的普适性分析，以期获得具有高保真度的含m3T的非天然碱基的短链和中长链RNA产物，为m3T核苷RNA定点转录提供了详细的依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于非天然碱基，具体涉及一种含m3t非天然碱基的体外转录方法及其评价分析方法。

技术介绍

1、在自然界中，生物体天然碱基构筑生命活动中的信息存储和表达体系，实现了生命形式的多样性。但是用于构筑生命的天然碱基仅有a、t/u、g、c，只能编码64种密码子，这限制了核酸分子的化学、结构和功能多样性，从而限制了核酸分子的生物学应用。非天然碱基技术是从源头设计、合成、评价和应用的技术体系，新型非天然碱基的发现可丰富核酸分子的化学和结构多样性、提高遗传信息的存储容量、扩展其生物和医学应用，目前已成为化学生物学一个新的前沿领域。

2、但是非天然碱基技术依然面对诸多的挑战。首先是具有优良复制和转录活性的非天然碱基结构多样性有限，目前仅有p/z、ds/px、tpt3/nam三类具有代表性的非天然碱基对，非天然碱基化学结构的局限性成为非天然碱基技术生物医学应用的瓶颈。因此，如何利用氢键位移、空间位阻、形状互补及疏水相互作用等原则设计、合成新型人工碱基对仍然是一项具有挑战性的任务。其次，不同类型非天然碱基的复制、转录、翻译效率和规律研究不足，缺乏有效的体内本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种含m3T非天然碱基的体外转录方法，其特征在于，所述含m3T非天然碱基的体外转录方法包括含m3T非天然碱基的短链RNA体外转录方法和含m3T非天然碱基的中长链RNA体外转录方法；

2.根据权利要求1所述的体外转录方法，其特征在于，所述体外转录的反应试剂包括Transcription Buffer、NTPs、RNase inhibitor、无机焦磷酸酶、无酶无菌水、rm3TTP。

3.根据权利要求1所述的体外转录方法，其特征在于，所述体外转录反应的条件为35～37℃反应5～8小时。

4.根据权利要求1所述的体外转录方法，其特征在于，所述体外转录方法...

【技术特征摘要】

1.一种含m3t非天然碱基的体外转录方法，其特征在于，所述含m3t非天然碱基的体外转录方法包括含m3t非天然碱基的短链rna体外转录方法和含m3t非天然碱基的中长链rna体外转录方法；

2.根据权利要求1所述的体外转录方法，其特征在于，所述体外转录的反应试剂包括transcription buffer、ntps、rnase inhibitor、无机焦磷酸酶、无酶无菌水、rm3ttp。

3.根据权利要求1所述的体外转录方法，其特征在于，所述体外转录反应的条件为35～37℃反应5～8小时。

4.根据权利要求1所述的体外转录方法，其特征在于，所述体外转录方法还包括利用含8m尿素5％变性聚丙烯酰胺凝胶对所述短链rna转录产物或中长链rna转录产物进行检测。

5.权利要求1～4任意一项所述的体外转录方法获得的含m3t非天然碱基的rna转录产物。

6.一种权利要求5所述的含m3t非天然碱基的rna转录产物的评价分析方法，其特征在于，所述评价分析方法包括对含m3t非天然碱基转录产物的保真度评价方法和含m3t非天然碱基的中长链rna转录产物的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李凌君，朱吾元，尚林春，王红磊，朱安莲，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：