杂色鲍雌核发育的诱导方法技术

涉及一种杂色鲍雌核发育的诱导方法，首先用紫外线辐射杂色鲍精液，失活杂色鲍精子的遗传物质，然后调整遗传失活精子的浓度，与正常杂色鲍卵子混合，启动杂色鲍卵子的雌核发育，再用细胞松弛素Ｂ或者６－二甲基氨基嘌呤抑制激活卵子的第２次减数分裂，使染色体组加倍，产生雌核发育二倍体，处理后的杂色鲍雌核发育二倍体卵转入育苗容器中，按普通杂色鲍种苗生产方法管理，生产出杂色鲍雌核发育二倍体种苗。该方法诱导后代成活率高，面盘幼体阶段成活率达９９．５％，远高于Ｆｕｊｉｎｏ等用于皱纹盘鲍的诱导方法中同阶段幼体的成活率（３．３％～９．０％）；而二倍体诱导率高达９５％～１００％，且卵子启动率高达９６％～１００％，高于Ａｒａｉ等报道的在皱纹盘鲍雌核发育中的３６％～４９％卵子启动率。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种贝类种苗雌核发育的诱导方法，尤其是杂色鲍雌核发育的诱导方法。(2)
技术介绍
海水养殖贝类种苗生产中，通过对鲍雌核发育诱导进行遗传育种，其产生的后代只含有母性亲本的基因，可快速纯化种质，加快育种速度。Arai等(日本水产年会志，1984，502019-2023)报道了应用紫外线照射失活皱纹盘鲍精子遗传物质，并用遗传失活精子激活皱纹盘鲍卵子的雌核发育，培育出皱纹盘鲍雌核发育单倍体幼体，但是由于雌核单倍体幼体高度畸形，根本无法进一步发育。Fujino等(日本水产年会志，1990，561755-1763)报道了皱纹盘鲍雌核发育二倍体的诱导方法先用紫外线失活皱纹盘鲍精子染色体，再用冷休克的方法诱导雌核发育卵染色体组加倍。应用该法Fujino等诱导出了皱纹盘鲍雌核发育二倍体，但是诱导后代成活率极低，在面盘幼体阶段就仅有3.3％～9.0％，6月龄成活率仅0.005％；同时诱导率也仅有50％～60％。杂色鲍是我国重要的鲍养殖种类，该种类虽然与皱纹盘鲍同属鲍科，但是两个种类有较大差别1)2个种在遗传上有较大差异，皱纹盘鲍二倍体有36条染色体，而杂色鲍仅有32条；2)2个种配子形态有较大差异，皱纹盘鲍精子属于过渡型，杂色鲍精子属于改进型。目前，杂色鲍的雌核发育研究尚属空白。(3)
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种诱导后代成活率高的杂色鲍雌核发育的诱导方法。本专利技术所说的杂色鲍雌核发育的诱导方法如下1)精子的遗传失活用紫外线辐射杂色鲍精液，紫外线照射剂量为60000～120000μW/cm2，精液厚度1～2mm，精子浓度106～108个/ml；2)卵子雌核发育的启动将杂色鲍成熟卵子及经过紫外线照射的杂色鲍精子混合，控制温度在23～30℃，精子最终浓度不少于105个/ml，启动杂色鲍卵子的雌核发育；3)雌核发育单倍体染色体组加倍；4)将上述处理后的杂色鲍雌核发育二倍体卵转入育苗容器中，按普通杂色鲍种苗生产方法管理，生产出杂色鲍雌核发育二倍体种苗。在步骤3)中所说的雌核发育单倍体染色体组加倍可用细胞松弛素B(Cytochalasin B，简为CB)处理或者用6-二甲基氨基嘌呤(6-dimethylaminopurine，简为6-DMAP)处理，抑制激活卵子的第2次减数分裂；所说的CB处理是卵子启动7～20分钟后，转移到含0.4～1.0mg/L细胞松弛素B的溶液中，使杂色鲍雌核发育单倍体染色体组加倍成为雌核发育二倍体；再将加倍处理后的雌核发育杂色鲍卵转移到0.033％～0.05％二甲基亚砜溶液中浸洗2次，每次10～15分钟，除去残留的细胞松弛素B；所说的6-DMAP处理是卵子启动7～20分钟后，转移到250～350μmol/L 6-二甲基氨基嘌呤(6-dimethylaminopurine，简为6-DMAP)的溶液中10～20分钟；本专利技术首先用紫外线辐射杂色鲍精液，失活杂色鲍精子的遗传物质，再用细胞松弛素B或者6-二甲基氨基嘌呤抑制激活卵子的第2次减数分裂，使染色体组加倍，产生雌核发育二倍体。该方法诱导后代成活率高，面盘幼体阶段成活率达99.5％，远高于Fujino等用于皱纹盘鲍的诱导方法中同阶段幼体的成活率(3.3％～9.0％)；而二倍体诱导率高达95％～100％，且卵子启动率高达96％～100％，高于Arai等报道的在皱纹盘鲍雌核发育中的36％～49％卵子启动率。(4)具体实施方式实施例11.精子的遗传失活取杂色鲍精液经紫外线照射，紫外线照射剂量为90000μW/cm2，精液厚度1.5mm，精子浓度108个/ml。2.卵子雌核发育的启动将海水水温调整到25±1℃，在此海水中混合杂色鲍成熟卵子及经过紫外线照射的杂色鲍精子，精子最终浓度至少为105个/ml，启动杂色鲍卵子的雌核发育。显微镜镜检，卵子启动率达96％～100％。3.雌核发育单倍体染色体组加倍卵子启动20分钟后，转移到含0.7±0.1mg/L细胞松弛素B的海水中20分钟，使杂色鲍雌核发育单倍体染色体组加倍成为雌核发育二倍体；再将加倍处理后的雌核发育杂色鲍卵转移到0.01％二甲基亚砜溶液中浸洗2次，每次15分钟，除去残留的细胞松弛素B。4.将上述处理后的杂色鲍雌核发育二倍体卵转入海水中，按普通杂色鲍种苗生产方法管理，生产出杂色鲍雌核发育二倍体种苗。染色体计数结果表明精子染色体失活率达100％，二倍体诱导率达95％～100％。面盘幼体成活率达96％～100％。实施例2按实施例1方法得到的杂色鲍雌核发育单倍体卵，在卵子启动15分钟后转移到300μmol/L 6-二甲基氨基嘌呤(6-dimethylaminopurine)海水溶液中处理15分钟，再转移到海水中，其余同实施例1的方法，得杂色鲍雌核发育二倍体种苗。本文档来自技高网...

【技术保护点】
杂色鲍雌核发育的诱导方法，其特征在于诱导方法如下：１）精子的遗传失活：用紫外线辐射杂色鲍精液，紫外线照射剂量为６００００～１２００００μＷ／ｃｍ↑［２］，精液厚度１～２ｍｍ，精子浓度１０↑［６］～１０↑［８］个／ｍｌ；２）卵子雌核发 育的启动：将杂色鲍成熟卵子及经过紫外线照射的杂色鲍精子混合，控制温度在２３～３０℃，精子最终浓度不少于１０↑［５］个／ｍｌ，启动杂色鲍卵子的雌核发育；３）雌核发育单倍体染色体组加倍；４）将上述处理后的杂色鲍雌核发育二倍体卵转入育苗容 器中，按普通杂色鲍种苗生产方法管理，生产出杂色鲍雌核发育二倍体种苗。

【技术特征摘要】
1.杂色鲍雌核发育的诱导方法，其特征在于诱导方法如下1)精子的遗传失活用紫外线辐射杂色鲍精液，紫外线照射剂量为60000～120000μW/cm2，精液厚度1～2mm，精子浓度106～108个/ml；2)卵子雌核发育的启动将杂色鲍成熟卵子及经过紫外线照射的杂色鲍精子混合，控制温度在23～30℃，精子最终浓度不少于105个/ml，启动杂色鲍卵子的雌核发育；3)雌核发育单倍体染色体组加倍；4)将上述处理后的杂色鲍雌核发育二倍体卵转入育苗容器中，按普通杂色鲍种苗生产方法管理，生产出杂色鲍雌核发育二倍体种苗。2.如权利要求1所述的杂色鲍雌核发育的诱导方法，其特征在于在步骤3)中所说的雌核发育单倍体染色体组加倍可用细胞松弛素B处理或者用6-...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯才焕，蔡明夷，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：92[中国|厦门]