一种解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及化学发光免疫分析技术领域，具体涉及一种解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法及应用，向第一磁珠重悬液中加入活化剂EDC和NHS；使用偶联缓冲液对活化后的第一磁珠重悬液进行清洗，得到浓度为5～20mg/mL第二磁珠重悬液；向第二磁珠重悬液中加入活化剂EDC和NHS以及抗体；向第二磁珠重悬液中加入pH为6～8，含50～400mmol/L乙醇胺封闭剂一进行一次封闭；去除一次封闭后的第二磁珠重悬液的上清，并加入封闭剂二进行二次封闭；使用磁珠工作液对二次封闭后的第二磁珠重悬液进行洗涤，并将羧基磁珠浓度定容至0.4mg/mL。本发明专利技术优化羧基磁珠包被工艺，提高磁珠活性，降低测试背景信号值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化学发光免疫分析，尤其涉及一种解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法及应用。

技术介绍

1、化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,clia)是将化学发光与免疫反应相结合，基于抗原和抗体的特异性反应，用于检测微量抗原或抗体的一种标记免疫测定技术，磁微粒化学发光为免疫诊断的主流技术，较其他免疫诊断而言拥有快速、灵敏、特异性强、自动化等特点。按原理分类，主要分为双抗夹心法和竞争法等，目前常用的磁珠有羧基磁珠、羧基磁珠、tosyl磁珠等。双抗夹心法是将抗体偶联于磁珠上，以及碱性磷酸酶标记的二抗抗体与样本中的抗原与其发生特异性反应，形成固相抗体-抗原-抗体夹心复合物，洗去未结合的物质，与底物3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐(amppd)反应，通过检测结果计算得到样本中的抗原含量。

2、目前，磁珠聚集的问题是ivd的一大痛点。羧基磁珠的包被方式常分为一步法和两步法，一步法拥有快速高效的优点，但其在包被过程中的活化产物可能对抗体与磁珠的偶联造成一定的影响；本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法，其特征在于，在“对羧基磁珠进行超声处理后使用包被前缓冲液进行冲段，得到浓度为5～20mg/mL的第一磁珠重悬液”中，所述包被前缓冲液为pH为5～7的PB缓冲液、MES缓冲液或CB缓冲液，优选pH为6.0的50mM MES缓冲液。

3.如权利要求2所述的解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法，其特征在于，在“向所述第一磁珠重悬液中加入活化剂EDC和NHS”中，所述EDC与磁珠的质量为1:2～1:20，所述EDC与所述NHS的质量比为1:1～1...

【技术特征摘要】

1.一种解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法，其特征在于，在“对羧基磁珠进行超声处理后使用包被前缓冲液进行冲段，得到浓度为5～20mg/ml的第一磁珠重悬液”中，所述包被前缓冲液为ph为5～7的pb缓冲液、mes缓冲液或cb缓冲液，优选ph为6.0的50mm mes缓冲液。

3.如权利要求2所述的解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法，其特征在于，在“向所述第一磁珠重悬液中加入活化剂edc和nhs”中，所述edc与磁珠的质量为1:2～1:20，所述edc与所述nhs的质量比为1:1～1:5，优选edc:磁珠:nhs的质量比为1:10:4。

4.如权利要求3所述的解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法，其特征在于，在“使用偶联缓冲液对活化后的所述第一磁珠重悬液进行清洗，得到浓度为5～20mg/ml第二磁珠重悬液”中，所述偶联缓冲液是指含有0.02～0.1％bsa及0.02～0.1％的表面活性剂(hlb＞15)，ph为5～7的pb缓冲液、mes缓冲液、cb缓冲液等，优选ph为6.0，0.04％bsa及0.1％月桂基硫酸钠的50mm mes缓冲液。

5.如权利要求4所述的解决羧基磁珠低包被量聚集的制备方法，其特征在于，在“向所述第二磁珠重悬液中加入活化剂edc和nhs以及抗体”中，edc与磁珠的质量为1:1～1:40，edc与nhs的质量比为1:1～1:3，抗体与磁珠...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄萍，管志平，刘红平，
申请(专利权)人：桂林优利特医疗电子有限公司，
类型：发明
国别省市：