修饰的因子Ⅶ多肽的液体组合物制造技术

本发明专利技术提供一种液体含水组合物，其中含有：（ｉ）一种修饰的因子Ⅶ多肽；（ｉｉ）一种试剂，其适于将ｐＨ保持在约４．０－约８．０；（ｉｉｉ）一种抗氧化剂；和（ｉｖ）一种试剂，其选自：钙盐、镁盐或其混合物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及含有修饰的因子VII多肽的液体含水组合物，和制备以及使用这些组合物的方法。更具体而言，本专利技术涉及对化学和/或物理降解稳定的液体组合物。
技术介绍
已经鉴定了与血液凝固过程有关的多种因子，包括因子VII，一种血浆糖蛋白。血管壁损伤后暴露于循环血的组织因子(TF)与循环中存在的FVIIa之间复合物的形成启动止血(haemostasis)，FVIIa的含量相当于总FVII蛋白量的约1％。FVII在血浆中主要以单链酶原存在，其被FXa切割成两条链的活化形式——FVIIa。已经研制了重组活化因子VIIa(rFVIIa)作为一种止血(pro-haemostatic)剂原。修饰的因子VII分子是凝血因子VII的衍生物，其中该分子(例如催化部位)被修饰，使得活性形式——因子VIIa——的催化活性降低，而与组织因子结合的能力保留。这些修饰的因子VII分子已经在WO92/15686、WO 94/27631、WO 96/12800和WO 97/47651中描述。因此，与天然因子VIIa分子类似，修饰的因子VIIa将结合组织因子，但是与天然因子VIIa相反，修饰的因子VII不会激活外源性凝血途径的后续步骤。因此，修饰的因子VII分子只是作为血纤蛋白凝块形成的一种抑制剂。因此，已经建议修饰的因子VIIa分子通过阻断凝血酶的产生和随后血纤蛋白的沉积用于血管损伤的治疗(WO 97/47651)。作为一种蛋白质，修饰的因子VII分子易于被物理降解，包括变性和聚集，如形成可溶的或不可溶的二聚体、寡聚体和多聚体形式的聚合体，或者易于被化学降解，包括例如水解、脱酰胺和氧化。总的后果包括修饰的因子VII分子的活性丧失，形成毒性和免疫原性的降解产物，在注射降解的修饰因子VII分子后造成血栓形成的严重危险，注射用针头的堵塞，和非均一性的危险。因此，含有修饰的因子VII的药物的安全性和有效性与修饰的因子VII的稳定性直接有关。因此，含有修饰的因子VII分子的组合物需要稳定。具体而言，需要贮存和处理含有修饰的因子VII的药物，而不需要冰箱，其中组合物在使用前可以长期贮存，如至少6个月。希望的是制备修饰的因子VIIa的施用形式，适于贮存和递送。理想地，药物产品作为一种液体贮存和施用。此外，药物产品也可以冻干，即冷冻干燥，然后在患者使用之前才添加适当的稀释剂重建。理想地，药物产品具有足以长期贮存(即6个月以上)的稳定性。决定制成的药物产品是以液体形式保存还是冻干保存通常以这些形式的蛋白质药物的稳定性为基础。蛋白质稳定性能够受如离子强度、pH、温度、重复冻融循环和暴露于剪切力等因素影响。由于物理不稳定性，包括变性和聚集(可溶的和不可溶的聚合体形成)，以及化学不稳定性，包括如水解、脱酰胺和氧化等，活性蛋白质可能丢失。关于蛋白质药物稳定性的综述，参见，例如Manning等人，PharmaceuticalResearch 6903-918(1989)。尽管可能发生蛋白质的不稳定性已经普遍知道，但是预测一种具体蛋白质的具体的不稳定性问题是不可能的。所有这些不稳定性都能导致蛋白质副产物或衍生物的形成，它们具有降低的活性、提高的毒性和/或提高的免疫原性。实际上，蛋白质沉淀可以导致血栓形成，剂型和剂量的不均一性，以及注射器堵塞。此外，翻译后修饰，如N端某些谷氨酸残基的γ羧化，和碳水化合物侧链的加入，也提供了在贮存后容易修饰的潜在位点。因此，一种蛋白质的所有药物组合物的安全性和有效性与其稳定性直接有关。以液体剂型保持稳定性一般不同于冻干剂型，因为分子运动的可能性大大提高，因此分子相互作用的可能性提高。以浓缩形式保持稳定性也是不同的，因为在升高的蛋白质浓度时倾向于形成聚合体。研制一种液体组合物要考虑许多因素。短期(即不到6个月)液体稳定性通常依赖于避免总体结构改变，如变性和聚集。这些方法在关于大量蛋白质的文献中有描述，并且存在稳定剂的许多例子。众所周知，可有效稳定一种蛋白质的试剂实际上可以使另一种不稳定。一旦蛋白质对于总体结构改变稳定，研制一种具有长期稳定性(例如6个月以上)的液体组合物依赖于针对该蛋白质特异的降解类型进一步稳定蛋白质。可能包括更多的具体降解类型，例如二硫键不规则、某些残基氧化、脱酰胺、环化。尽管不总是能够确定个别的降解种，但是发展了测定法监测细微的改变，以监测具体赋形剂独特地稳定目的蛋白质的能力。除了稳定性考虑之外，人们通常选择全世界多家医药管理机构批准的赋形剂。组合物接近等渗、组合物在注射/输液后pH处于生理适当范围内是希望的，可能导致患者的其它疼痛和不适。关于蛋白质组合物的综述，参见，例如Cleland等人，稳定的蛋白质组合物的研发详述蛋白质聚集、脱酰胺和氧化，CriticalReviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 1993，10(4)307-377；和Wang等人，蛋白质和肽的肠胃外组合物稳定性和稳定剂，Journal ofParenteral Science and Technology 1988(增刊)，42(2S)。关于蛋白质稳定的其它重要公开文本如下U.S.20010031721.A1(American Home Products)涉及高度浓缩、冻干的液体因子IX组合物。U.S.5,770,700(遗传学研究所)涉及液体因子IX组合物。WO 97/19687(美国红十字会)涉及血浆蛋白(特别是因子VIII和因子IX)的液体组合物。U.S.4,297,344公开了凝血因子II和VIII、抗凝血酶III和纤溶酶原对热的稳定，方法是添加选择的氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、羟脯氨酸、谷氨酰胺和氨基丁酸，和碳水化合物，如单糖、寡糖或糖醇。研制修饰的因子VIIa的含水组合物具有以下优点消除了重建的错误，从而提高了剂量精确性，以及简化了产品的临床应用，从而提高了患者的顺应性。理想地，修饰的因子VIIa的组合物应当在宽蛋白质浓度范围内稳定6个月以上。这使得施用方法具有灵活性。浓缩形式通常允许施用较小的体积，从患者的角度出发这是非常希望的。关于施用和使用的容易程度，液体组合物比冻干产品有许多优点。修饰的因子VII现在能够在液体制剂中提供，需要在-80℃下冻存。因此，本领域需要提高修饰的因子VII多肽的稳定性和提供适于在2-8℃下长期贮存6个月以上的液体组合物的方法。因此，本专利技术的一个目的是提供修饰的因子VII多肽的含水组合物，它将可接受地控制降解产物。专利技术概述我们发现，修饰的因子VII或其类似物(“修饰的因子VII多肽”)，当与适于将pH保持在约4.0-约8.0的试剂、抗氧化剂和钙盐一起在水溶液中配制时，在物理和化学上是稳定的。一方面，本专利技术提供一种液体含水组合物，其含有(i)一种修饰的因子VII多肽；(ii)一种试剂，其适于将pH保持在约4.0-约8.0范围；(iii)一种抗氧化剂；和(iv)一种试剂，其选自钙盐、镁盐或其混合物。在不同实施方案中，pH保持在约4.0-约7.0，如约4.5-约7.0，约5.0-约7.0，约5.5-约7.0，或约6.0-约7.0。在一个实施方案中，抗氧化剂(iii)选自L-或D-甲硫氨酸，甲硫氨酸类似物，含甲硫氨酸的肽，甲硫氨酸同源物，抗坏血酸，半胱氨酸，高半胱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种液体、含水组合物，其含有：（ｉ）一种修饰的因子Ⅶ多肽；（ｉｉ）一种适于将ｐＨ保持在约４．０－约８．０范围内的试剂；（ｉｉｉ）一种抗氧化剂；和（ｉｖ）一种选自：钙盐、镁盐或其混合物的试剂。

【技术特征摘要】
DK 2001-12-21 PA200101948;DK 2001-12-21 PA200101941.一种液体、含水组合物，其含有(i)一种修饰的因子VII多肽；(ii)一种适于将pH保持在约4.0-约8.0范围内的试剂；(iii)一种抗氧化剂；和(iv)一种选自钙盐、镁盐或其混合物的试剂。2.根据权利要求1的组合物，其中pH保持在约4.0-约7.0，如约4.5-约7.0，约5.0-约7.0，约5.5-约7.0，或约6.0-约7.0的范围内。3.根据权利要求1或权利要求2的组合物，其中抗氧化剂(iii)选自L-或D-甲硫氨酸、甲硫氨酸类似物、含甲硫氨酸的肽、甲硫氨酸同系物、抗坏血酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、谷胱甘肽、胱氨酸和胱硫醚。4.根据权利要求3的组合物，其中所述抗氧化剂是L-甲硫氨酸。5.根据权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述抗氧化剂以约0.1mg/ml-约5.0mg/ml，如约0.1mg/ml-约4mg/ml，约0.1mg/ml-约3mg/ml，约0.1mg/ml-约2mg/ml，或约0.5mg/ml-约2mg/ml的浓度存在。6.根据权利要求1-5中任一项的组合物，它还含有(v)一种张力调节剂。7.根据权利要求6的组合物，其中所述张力调节剂(v)选自中性盐；单糖、二糖或多糖；糖醇；氨基酸；或小肽，或至少两种所述调节剂的混合物。8.根据权利要求7的组合物，其中所述张力调节剂是甘露醇和/或一种中性盐，优选地氯化钠。9.根据权利要求6-8中任一项的组合物，其中所述张力调节剂(v)以1mM-500mM的浓度存在。10.根据权利要求9的组合物，其中浓度为10-250mM。11.根据权利要求1-10中任一项的组合物，它还含有(vi)一种非离子表面活性剂。12.根据权利要求11的组合物，其中所述非离子表面活性剂是一种聚山梨醇酯或泊洛沙姆或聚氧乙烯烷基醚，如泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80，或聚氧23月桂醚。13.根据权利要求1-12中任一项的组合物，其中适于将pH保持在约4.0-约8.0范围内的试剂(ii)选自下列酸和盐柠檬酸盐、乙酸盐、组氨酸、苹果酸盐、磷酸盐、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸盐、甘氨酰甘氨酸、PIPES、甘氨酸或至少两种所述试剂的混合物。14.根据权利要求13的组合物，其中试剂(ii)的浓度为约1mM-约50mM。15.根据权利要求14的组合物，其中试剂(ii)的浓度约为10mM。16.根据权利要求1-15中任一项的组合物，其中钙盐和/或镁盐(试剂(iv))以约5mM-约150mM，如约5mM-约100mM，约5mM-约50mM，如约10mM-约50mM的浓度存在。17.根据权利要求1-16中任一项的组合物，其中钙盐选自氯化钙、乙酸钙、葡糖酸钙和乙酰丙酸钙。18.根据权利要求1-16中任一项的组合物，其中镁盐选自氯化镁、乙酸镁、硫酸镁、葡糖酸镁和乙酰丙酸镁。19.根据权利要求1-18中任一项的组合物，其还含有(vii)一种防腐剂，如苯酚、苄醇、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、羟苯甲酸甲酯、羟苯甲酸丙酯、氯苄烷铵或苄索氯铵。20.根据权利要求1-19中任一项的组合物，它是等渗的。21.根据权利要求1-20中任一项的组合物，它是为了药物施用而配制的。22.根据权利要求1-21中任一项的组合物，它在2-8℃下至少稳定6个月。23.根据权利要求1-22中任一项的组合物，其中当使用如本说明书所述凝血测定、蛋白水解测定或TF结合测定法中的一种或多种检测时，修饰的因子VII多肽相对于野生型因子VIIa，其生物活性小于野生型因子VIIa的比活性的约25％，优选地小于约10％，更优选地小于约5％，最优选地小于约1％。24.根据权利要求1-23中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：BL汉森，MB詹森，T科菲尔特，
申请(专利权)人：诺沃娜第克公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]