基于金胶和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种miRNAs的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体公开了基于GNPs和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种miRNAs的方法。所述分析方法包括如下步骤：首先，所制备的DNA功能化GNPs、DNA功能化磁珠、发卡DNA与待测样品充分混合并孵育。经磁分离后，得到上层红色澄清溶液和磁珠沉淀物。进一步地，向磁珠沉淀物中加入K<supgt;+</supgt;、Hemin以及H<subgt;2</subgt;O<subgt;2</subgt;/ABTS等催化底物溶液，混合后进行孵育反应，经磁分离步骤后得到绿色澄清溶液。最后，通过肉眼观察或UV‑vis测定所收集的两种不同颜色澄清溶液得出两种肿瘤标志物的浓度。本发明专利技术无需复杂的纳米探针合成，无需借助昂贵的精密仪器，具有基于多标志物检测的高准确性、运行成本低、检测简单、选择性好等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及基于金胶和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种mirnas的方法。

技术介绍

1、肿瘤标志物是出现在血液和组织中与肿瘤有关的分子，找到一种早期灵敏检测肿瘤标志物的方法对肿瘤诊断和治疗至关重要。近年来，相关研究表明mirna是一种肿瘤早期筛查的生物标志物，它们的异常表达水平与肿瘤的发生和发展密切相关。为了进一步提高检测的灵敏度以实现肿瘤早期诊断，人们建立了一系列基于核酸信号放大的检测方法。根据酶的参与与否，信号放大方式可分为基于酶介导的信号放大和无酶介导的信号放大两类。基于酶介导的信号放大技术中所用酶的价格昂贵，保存时间较短，且酶活性易受环境影响。而基于杂交链式反应（hcr）、催化发卡自组装反应（cha）的信号放大因无需酶催化、无需专业技术人员及扩增设备、常温下可发生反应、操作简便、选择性多、反应稳定、检测特异性强以及灵敏度高等优点，被广泛用于mirnas的灵敏检测。

2、尽管无酶介导的信号放大策略显著提高了检测的灵敏度，但是这些检测技术仍然需要借助复杂昂贵的仪器设备输出检测信号。而比色生物传感技术无需昂贵而精密的仪器本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于GNPs和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种miRNAs的方法，其特征在于，包括基于金胶（GNPs）和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种miRNAs的方法。

2.根据权利要求1所述的基于GNPs和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种miRNAs的方法，其特征在于，所制备的DNA功能化GNPs、DNA功能化磁珠、发卡DNA与待测样品充分混合并孵育，经磁分离后，得到上层红色澄清溶液和磁珠沉淀物，进一步地，向磁珠沉淀物中加入K+、Hemin以及H2O2/ABTS等催化底物溶液，混合后进行孵育反应，经磁分离步骤得到绿色澄清溶液。

3.根据权利要求2所述的基...

【技术特征摘要】

1.一种基于gnps和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种mirnas的方法，其特征在于，包括基于金胶（gnps）和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种mirnas的方法。

2.根据权利要求1所述的基于gnps和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种mirnas的方法，其特征在于，所制备的dna功能化gnps、dna功能化磁珠、发卡dna与待测样品充分混合并孵育，经磁分离后，得到上层红色澄清溶液和磁珠沉淀物，进一步地，向磁珠沉淀物中加入k+、hemin以及h2o2/abts等催化底物溶液，混合后进行孵育反应，经磁分离步骤得到绿色澄清溶液。

3.根据权利要求2所述的基于gnps和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种mirnas的方法，其特征在于，所述gnps粒径为10~50 nm。

4.根据权利要求2所述的基于gnps和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种mirnas的方法，其特征在于，所述dna功能化gnps的制备采用巯基化dna与gnps偶联得到；偶联反应温度为25~40 oc；反应时间为8~24小时。

5.根据权利要求2所述的基于gnps和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种mirnas的方法，其特征在于，所述磁珠粒径为0.2~1 μm。

6.根据权利要求2所述的基于gnps和纳米酶的双比色生物传感器同时检测两种mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏娟，葛炜民，赵兴琦，丁蕊，周毅，
申请(专利权)人：南京科技职业学院，
类型：发明
国别省市：