多价脑膜炎球菌多糖-蛋白质缀合疫苗制造技术

本发明专利技术描述了可以对脑膜炎球菌疾病提供广泛保护的联合疫苗，所述脑膜炎球菌疾病由病原性细菌脑膜炎奈瑟氏球菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）所致。疫苗由４种不同的多糖－蛋白质缀合物组成，这些缀合物被配制成单一剂量形式的疫苗。将来源于脑膜炎奈瑟氏球菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ－１３５和Ｙ的纯化荚膜多糖化学活化，并通过共价化学键选择性连接至载体蛋白质上，形成多糖－蛋白质缀合物，所述缀合物能够在儿童以及成人中引起对多种脑膜炎奈瑟氏球菌株系的长效免疫。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
多价脑膜炎球菌多糖－蛋白质缀合疫苗的制作方法本申请要求美国临时专利申请号60/263,435(2001年1月23日提交)的权利。
技术介绍
专利
本专利技术总的来说涉及医学领域，并且更具体地，本专利技术涉及微生物学、免疫学、疫苗以及通过免疫对细菌病原体感染的预防。相关领域概述脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitides)是全球细菌性脑膜炎和脓毒症的主要原因。在最近的30年中，地方性脑膜炎球菌疾病的发病率在发达国家为每100,000人中有1到5人，而在发展中国家为每100,000人中10到25人(Reido，F.X.等人，1995)。流行期间脑膜炎球菌疾病的发病率可达每1000,000人中1,000人。在美国每年大约有2,600例细菌性脑膜炎病例，而在发展中国家平均有330,000例。病例致死率在10到20％之间。病原脑膜炎球菌被多糖荚膜所包被，附着在生物体外膜表面。基于荚膜多糖的免疫学特异性，已经鉴定出13种不同的脑膜炎球菌血清型(Frasch，C.E.等人，1985)。这13个血清型中的5个引起了大部分脑膜炎球菌疾病；它们包括血清型A、B、C、W135和Y。血清型A引起大部分流行性疾病。血清型B、C和Y引起大多数地方性疾病和疾病的区域性爆发。人类鼻口咽粘膜是唯一已知的脑膜炎奈瑟氏球菌的天然贮库。细菌在粘膜细胞的外表面以及鼻咽的上皮下组织定居。脑膜炎球菌可被持续携带几个月，脑膜炎球菌通过直接接触或通过空气飞沫传播。脑膜炎球菌是以吞噬泡的形式通过胞吞作用经由粘膜上皮侵入的。对入侵的脑膜炎球菌的宿主防御依赖于补体介导的溶菌作用。在补体介导的溶菌作用中发挥作用的血清抗体相当大部分直接针对外部荚膜多糖。基于脑膜炎球菌多糖的疫苗已经被描述，其引起针对荚膜多糖的免疫应答。这些抗体可以对血清型特异性脑膜炎球菌引起补体介导的溶菌作用。脑膜炎球菌多糖疫苗显示对儿童和成人有效(Peltola，H.等人，1977以及Artenstein，M.S.等人，1970)，但对于婴儿和幼儿其效能有限(Reingold，A.L.等人，1985)。对年幼群体，此多糖的后继给药产生弱加强应答或无加强应答(Goldschneider，I.等人，1973以及Gold，R.等人，1977)。脑膜炎球菌多糖疫苗的保护期不能持续很长，并且据估计对成人和大于4岁的儿童而言为3到5年(Brandt，B.等人，1975，Kyhty，H.等人，1980以及Ceesay，S.J.等人，1993)。对1至4岁的儿童而言保护期少于3年(Reingold，A.L.等人，1985)。多糖不能与主要组织相容性复合体分子结合，而这是抗原呈递和刺激T-辅助淋巴细胞的前提条件，也即它们是非T-细胞依赖性抗原。多糖能够不需T-辅助淋巴细胞的辅助而刺激B淋巴细胞产生抗体。由于对B淋巴细胞的非T-细胞依赖性刺激，这些抗原免疫后缺乏记忆诱导。在成人体内，多糖抗原可以产生非常有效的非T-细胞依赖性应答，但在婴儿和幼儿的不成熟免疫系统中这些非T-细胞依赖性应答却很弱。非T-细胞依赖性多糖抗原可以通过将多糖共价连接至蛋白质分子(“载体”或“载体蛋白质”)上而转变为T-细胞依赖性抗原。与缀合疫苗的多糖组分结合的B细胞可以被肽特异的T辅助细胞激活，所述肽为缀合的载体蛋白质的一部分。对载体蛋白质的T-辅助细胞应答可以增加针对多糖的抗体的产生。已证明，血清型B多糖在人群中具有极弱的免疫原性至无免疫原性(Wyle，F.A.等人，1972)。这一血清型多糖与蛋白质的化学连接在实验动物中没有显著改变免疫应答(Jennings，H.J.等人，1981)。据认为，对这一血清型多糖缺乏免疫应答的原因是血清型B多糖与多唾液酸化的宿主糖蛋白之间的结构相似性，所述宿主糖蛋白例如神经细胞粘附分子。一种基于血清型C多糖的脑膜炎球菌缀合疫苗已有叙述。这种单价疫苗可引起针对相应于血清型C的脑膜炎奈瑟氏球菌株系上存在的荚膜多糖的强功能性抗体应答。这种疫苗仅仅能够防止由血清型C细菌引起的疾病。现有的基于脑膜炎球菌多糖的疫苗对幼儿的用途有限，而且不能为成人提供长时间保护。已被证实能够对所有有危险感染脑膜炎球菌的群体(包括儿童)产生长时间保护的唯一脑膜炎球菌疫苗是基于来源于单一脑膜炎奈瑟氏球菌血清型的多糖的疫苗，其不能提供针对其它血清型感染的保护。因此，就需要一种能够在脑膜炎球菌感染的易感儿童和成人中对脑膜炎球菌疾病产生广谱、长效保护的脑膜炎球菌缀合疫苗。本专利技术的多价脑膜炎球菌多糖通过提供疫苗制剂解决了这一需要，其中在所述制剂中来源于脑膜炎奈瑟氏球菌主要致病血清型的免疫原性多糖通过与载体蛋白质缀合而转变成T-细胞依赖性抗原。专利技术概述本专利技术提供由病原性脑膜炎奈瑟氏球菌制备的脑膜炎球菌多糖-蛋白质缀合物的免疫学组合物，其可用于治疗疾病。本专利技术提供包含有两种或多种蛋白质-多糖缀合物的免疫学组合物，其中每一缀合物各包含有连接至载体蛋白质的来源于脑膜炎奈瑟氏球菌的荚膜多糖。本专利技术提供包含有两种或多种不同蛋白质-多糖缀合物的免疫学组合物，其中每一缀合物各包含有连接至载体蛋白质的来源于脑膜炎奈瑟氏球菌不同血清型的荚膜多糖。本专利技术提供由病原性脑膜炎奈瑟氏球菌制备的脑膜炎球菌多糖-蛋白质缀合物的疫苗。本专利技术提供多价脑膜炎球菌疫苗，其由免疫学有效量的2到4种不同的蛋白质-多糖缀合物组成，其中每一缀合物各包含有不同的连接至载体蛋白质的荚膜多糖，并且其中每一荚膜多糖选自血清型A、C、W135和Y的荚膜多糖。本专利技术也提供制备多价脑膜炎球菌多糖-蛋白质组合物的方法，其包括从病原性脑膜炎奈瑟氏球菌中纯化两种或多种荚膜多糖；将纯化的多糖与一种或多种载体蛋白质缀合，以及混合这些缀合物以产生多价脑膜炎球菌多糖-蛋白质组合物。本专利技术还提供诱导对脑膜炎奈瑟氏球菌荚膜多糖的免疫学应答的方法，其包括给人类或动物施用免疫学有效量的本专利技术免疫学组合物。本专利技术提供多价脑膜炎球菌疫苗，其由免疫学有效量的2到4种不同的蛋白质-多糖缀合物组成，其中每一缀合物各含有不同的连接至载体蛋白质的荚膜多糖，并且其中每一荚膜多糖选自血清型A、C、W135和Y的荚膜多糖。本专利技术提供保护脑膜炎奈瑟氏球菌易感人群或动物的方法，其包括向人类或动物施用免疫学有效剂量的本专利技术疫苗。于此引用的所有专利、专利申请以及其它出版物特此全面引入作为参考。专利技术详述本专利技术包括具有两种或多种不同的蛋白质-多糖缀合物的免疫学组合物，其中每一缀合物各包含有一种连接至载体蛋白质的荚膜多糖。因此，本专利技术包括含有两种或多种不同荚膜多糖的组合物，其中所述英膜多糖被连接至一种或多种载体蛋白质上。荚膜多糖可以通过本领域技术人员所公知的标准技术制备(参考文献)。在本专利技术中荚膜多糖优选制备自脑膜炎奈瑟氏球菌血清型A、C、W135和Y。在优选的实施方案中，这些脑膜炎球菌血清型缀合物分别制备然后配制成单一剂量形式。例如，从脑膜炎奈瑟氏球菌血清型A、C、W135和Y分别纯化荚膜多糖。在本专利技术的优选实施方案中，纯化的多糖在连接至载体蛋白质前被解聚并活化。在本专利技术的优选实施方案中利用温和氧化条件将来源于脑膜炎奈瑟氏球菌血清型A、C、W135和Y的英膜多糖部分解聚。在解聚或部分解聚多糖后可以接着进行活化步骤，“活化”是指对多糖进本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有２、３或４种不同蛋白质－多糖缀合物的免疫学组合物，其中每一缀合物各包含有一种英膜多糖，所述英膜多糖与一种或多种载体蛋白质缀合并来源于两种或多种脑膜炎奈瑟氏球菌血清型。

【技术特征摘要】
US 2001-1-23 60/263,4351.含有2、3或4种不同蛋白质-多糖缀合物的免疫学组合物，其中每一缀合物各包含有一种荚膜多糖，所述荚膜多糖与一种或多种载体蛋白质缀合并来源于两种或多种脑膜炎奈瑟氏球菌血清型。2.权利要求1所述的免疫学组合物，其中荚膜多糖选自来源于脑膜炎奈瑟氏球菌血清型A、C、W-135和Y的荚膜多糖。3.权利要求1所述的免疫学组合物，其中荚膜多糖来源于脑膜炎奈瑟氏球菌血清型A和C。4.权利要求1所述的免疫学组合物，其中荚膜多糖来源于脑膜炎奈瑟氏球菌血清型A、C、W-135和Y。5.权利要求1所述的免疫学组合物，其中载体蛋白质为白喉类毒素。6.权利要求1所述的免疫学组合物，其还包含有佐剂。7.权利要求5所述的免疫学组合物，其中佐剂为氢氧化铝。8.权利要求5所述的免疫学组合物，其中佐剂为磷酸铝。9.诱导对脑膜炎奈瑟氏球菌荚膜多糖的免疫学应答的方法，所述方...

【专利技术属性】
技术研发人员：RP赖亚尔，
申请(专利权)人：安万特巴斯德公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]