【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、三维(3d)细胞培养是一种有前景的技术，以应用于开发和鉴定治疗性治疗。相对于二维细胞培养系统，三维细胞培养的益处可以在于更接近地模拟生物功能。高质量的细胞样品制备对于各种临床和研究应用非常重要。3-d细胞培养可以接近地代表体内特性。需要能够以适当的成本有效且可重复地培养细胞的高通量3d细胞培养方法和系统。
技术实现思路
1、本文公开了一种用于在孔中产生三维水凝胶系统的方法，所述方法包括：(a)将包括第一丙烯酸酯和第一硫醇化聚合物的第一混合物递送到孔中，由此在所述孔内形成凹形弯月面；(b)使所述第一混合物的所述第一丙烯酸酯和所述第一硫醇化聚合物交联以形成第一固化的水凝胶层，其中所述第一固化的水凝胶层包括凹形上表面；(c)将包括第二丙烯酸酯和第二硫醇化聚合物的第二混合物递送到所述第一固化的水凝胶层的顶部上的所述孔中；(d)使所述第二混合物的所述第二丙烯酸酯和所述第二硫醇化聚合物交联以在所述第一固化的水凝胶层的顶部上形成第二固化的水凝胶层，其中所述第二固化的水凝胶层包括比所述第一...
【技术保护点】
1.一种用于在孔中产生三维水凝胶系统的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二固化的层的所述上表面是基本上平面的。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中使所述第一丙烯酸酯和所述第一硫醇化聚合物交联以形成所述第一固化的水凝胶层包括在将所述第一混合物安置于所述孔内的同时并在将所述第二混合物已递送到所述孔中之前，将所述第一混合物暴露于紫外光。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使所述第二丙烯酸酯和所述第二硫醇化聚合物交联以形成所述第二固化的水凝胶层包括在将所述第一固化的水凝胶层和所述第二混合物两...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于在孔中产生三维水凝胶系统的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二固化的层的所述上表面是基本上平面的。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中使所述第一丙烯酸酯和所述第一硫醇化聚合物交联以形成所述第一固化的水凝胶层包括在将所述第一混合物安置于所述孔内的同时并在将所述第二混合物已递送到所述孔中之前，将所述第一混合物暴露于紫外光。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使所述第二丙烯酸酯和所述第二硫醇化聚合物交联以形成所述第二固化的水凝胶层包括在将所述第一固化的水凝胶层和所述第二混合物两者都安置于所述孔内的同时，将所述第二混合物暴露于紫外光。
5.根据权利要求4所述的方法，其中将所述第一混合物暴露于紫外光的时间段长于将所述第二混合物暴露于紫外光的时间段。
6.根据权利要求5所述的方法，其中将所述第二混合物暴露于紫外光小于12秒，并且将所述第一混合物暴露于紫外光大于12秒。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述第一混合物和所述第二混合物暴露于紫外光10秒至20秒。
8.根据权利要求4至7中任一项所述的方法，其中所述紫外光的平均波长为320nm和390nm。
9.根据权利要求4至8中任一项所述的方法，其中所述紫外光的强度介于200mw/cm2与300mw/cm2之间。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二混合物进一步包括多个细胞。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多个细胞为未聚集的细胞。
12.根据权利要求10至11中任一项所述的方法，其中所述多个细胞在(c)之前已被染色。
13.根据权利要求12所述的方法，其中已被染色的所述多个细胞已用以下中的一种或多种染色：(i)对细胞核具有特异性的染料，(ii)对细胞膜具有特异性的染料，(iii)对活细胞具有特异性的染料，以及(iv)对死细胞具有特异性的染料。
14.根据权利要求13所述的方法，其中已被染色的所述多个细胞已用以下中的一种或多种染色：亲脂性羰花青染料、双苯并酰亚胺、氧杂蒽染料或碘化丙啶。
15.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，其中所述多个细胞在(c)之前已用荧光标签标记。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二混合物不包含层粘连蛋白。
17.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述第二混合物进一步包括层粘连蛋白，使得层粘连蛋白非共价地分布在第二固化的水凝胶内。
18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一混合物进一步包括光引发剂。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述光引发剂包括2-羟基-4'-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯丙酮。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二混合物进一步包括光引发剂。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述光引发剂包括2-羟基-4'-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯丙酮。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括将细胞培养基添加到所述三维水凝胶系统中。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述细胞培养基包括以下中的一种或多种：磷酸钠、氯化钾、碳酸氢钠、硝酸铁、氯化钙或氯化钾。
24.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一混合物在被递送到所述孔中时的运动粘度介于0.5平方毫米/秒与10平方毫米/秒之间。
25.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二混合物在被递送到所述孔中时的运动粘度介于0.5平方毫米/秒与10平方毫米/秒之间。
26.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一丙烯酸酯和所述第二丙烯酸酯中的一者或两者为多臂peg丙烯酸酯。
27.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一丙烯酸酯和所述第二丙烯酸酯中的一者或两者为peg二丙烯酸酯。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述第一混合物的所述peg二丙烯酸酯的数均分子量大于三千道尔顿。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·马佐奇，R·尼利，KR·斯凯利，E·米切尔，
申请(专利权)人：知名医药公司，
类型：发明
国别省市：
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