基于CRISPR/Cas的等温快速可视化检测番茄花叶病毒的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了基于CRISPR/Cas的等温快速可视化检测番茄花叶病毒的试剂盒及其检测方法。本发明专利技术属于植物检疫技术领域，具体涉及基于CRISPR/Cas的等温快速可视化检测番茄花叶病毒的试剂盒及其检测方法。本发明专利技术用于鉴定番茄花叶病毒的组合物包含特异于待检测核酸的crRNA、RT‑RPA引物对、Cas12蛋白和荧光报告探针，RT‑RPA引物对由引物ToMV‑F和引物ToMV‑R组成，荧光报告探针是一端连有荧光基团，另一端连有淬灭基团的单链RNA。本发明专利技术对待测样本可以实现快速、精准、可视化检测，具有良好特异性，灵敏度高，便于操作，检测效率高等优点，可以满足对田间和口岸检测的基本需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物检疫，具体涉及基于crispr/cas的等温快速可视化检测番茄花叶病毒的试剂盒及其检测方法。

技术介绍

1、番茄花叶病毒(tomato mosaic virus，tomv)为正义单链rna病毒，属于植物杆状病毒科(virgaviridae)烟草花叶病毒属(tobamovirus)，主要危害番茄(lycopersiconesculentum)和辣椒，多数茄科植物易染病。被tomv侵染的叶片主要症状为浅绿或深绿色花叶、斑驳、有时幼叶畸形；冬季温度低于20℃时易出现卷须症状，植株矮化；有些果实上也会出现斑驳症状；发病植株在茎或叶柄上形成长形坏死条纹，导致茎叶或果实坏死。

2、tomv在全世界广泛分布，可以通过机械接种、嫁接和植株间接触传播，还可以通过种子传毒。番茄的种传率可达94％，病毒存在于种子的外部粘液、种皮中。有时在胚乳中也有病毒,但种胚中未发现病毒。幼苗移栽时容易感染上病毒。胚乳受病毒感染的种子，病毒的侵染活性至少可维持9年。

3、重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplifi本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于鉴定番茄花叶病毒的组合物，所述组合物包含特异于待检测核酸的crRNA、RT-RPA引物对、Cas12蛋白和荧光报告探针，所述RT-RPA引物对由引物ToMV-F、引物ToMV-R组成，所述荧光报告探针是一端连有荧光基团，另一端连有淬灭基团的单链RNA；所述引物ToMV-F为如下(b1)或(b2)：

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物还包括进行核酸扩增的试剂。

3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述核酸扩增为逆转录重组酶聚合酶扩增。

4.一种鉴定番茄花叶病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求1-3任一所述的组合...

【技术特征摘要】

1.用于鉴定番茄花叶病毒的组合物，所述组合物包含特异于待检测核酸的crrna、rt-rpa引物对、cas12蛋白和荧光报告探针，所述rt-rpa引物对由引物tomv-f、引物tomv-r组成，所述荧光报告探针是一端连有荧光基团，另一端连有淬灭基团的单链rna；所述引物tomv-f为如下(b1)或(b2)：

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物还包括进行核酸扩增的试剂。

3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述核酸扩增为逆转录重组酶聚合酶扩增。

4.一种鉴定番茄花叶病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张永江，赵振兴，董铮，王思元，范奇璇，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：