【技术实现步骤摘要】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.一种用于消耗靶核酸序列的方法，所述方法包括：
2.权利要求1所述的方法，其中酶促延伸所述捕获引物核酸分子包括：
3.权利要求2所述的方法，其中所述延伸酶选自聚合酶、逆转录酶及其组合。
4.权利要求2和3中任一项所述的方法，其中酶促切割双链样品核酸分子包括：
5.权利要求4所述的方法，其中在酶促延伸所述捕获引物核酸分子之后，将所述降解酶引入样品溶液。
6.权利要求4所述的方法，其中在酶促延伸所述捕获引物核酸分子之前，将所述降解酶引入样品溶液。
7.权利要求4所述的方法，其中所述降解温度在所述退火
<...【技术特征摘要】
1.一种用于消耗靶核酸序列的方法，所述方法包括：
2.权利要求1所述的方法，其中酶促延伸所述捕获引物核酸分子包括：
3.权利要求2所述的方法，其中所述延伸酶选自聚合酶、逆转录酶及其组合。
4.权利要求2和3中任一项所述的方法，其中酶促切割双链样品核酸分子包括：
5.权利要求4所述的方法，其中在酶促延伸所述捕获引物核酸分子之后，将所述降解酶引入样品溶液。
6.权利要求4所述的方法，其中在酶促延伸所述捕获引物核酸分子之前，将所述降解酶引入样品溶液。
7.权利要求4所述的方法，其中所述降解温度在所述退火温度以下。
8.权利要求4所述的方法，其中所述降解温度在所述延伸温度以下。
9.权利要求4所述的方法，其中所述降解温度是所述降解酶的活性温度。
10.权利要求4-9中任一项所述的方法，其中所述降解酶是核糖核酸酶。
11.权利要求4-9中任一项所述的方法，其中所述降解酶是核酸内切酶。
12.权利要求11所述的方法，其中所述核酸内切酶是核糖核酸内切酶。
13.权利要求12所述的方法，其中所述核糖核酸内切酶选自rna酶hii、rna酶h、rna酶iii及其组合。
14.权利要求4-12中任一项所述的方法，其中所述降解酶是rna酶hii。
15.权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述捕获引物核酸分子是封闭的捕获引物核酸分子，其中所述封闭的捕获引物核酸分子被配置成阻断封闭的捕获引物核酸分子通过延伸酶在3’末端的酶促延伸。
16.权利要求4-15中任一项所述的方法，其中酶促切割所述双链样品核酸分子包括降解设置在所述双链样品核酸分子上的通用衔接子核酸序列的部分。
17.权利要求16所述的方法，其中酶促切割所述双链样品核酸分子包括切割所述双链样品核酸分子的通用衔接子核酸分子的骨架。
18.权利要求16所述的方法，其中酶促切割所述双链样品核酸分子包括消化所述双链样品核酸分子的通用衔接子核酸分子的部分。
19.权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述捕获引物核酸分子与所述多个样品核酸分子的一个或多个第二样品核酸分子的第二靶核酸序列互补或部分互补，其中所述第二靶核酸序列不同于所述靶核酸序列。
20.权利要求2-19中任一项所述的方法，其中使样品溶液保持在捕获引物核酸分子的退火温度附近或以下包括使样品溶液保持在捕获引物核酸分子的退火温度的约1℃至约5℃的范围内的温度。
21.权利要求19和20中任一项所述的方法，其中捕获引物核酸分子和所述第二靶核酸序列具有在退火温度的约1℃至约5℃的范围内的第二退火温度。
22.权利要求1-21中任一项所述的方法，还包括对消耗的样品溶液重复步骤(b)和(c)一次或多次。
23.权利要求22所述的方法，还包括使样品溶液的温度保持在所述多个样品核酸分子和所述捕获引物核酸分子的解链温度或以上。
24.权利要求1-23中任一项所述的方法，还包括：
25.权利要求24所述的方法，其中对所述消耗的样品溶液中的所述多个样品核酸分子进行核酸扩增反应不扩增或基本上不扩增已经被降解酶降解的样品核酸分子。
26.权利要求1-25中任一项所述的方法，还包括对所述扩增的消耗的样品溶液进行反应，所述反应选自核酸片段化反应、酶促末端修复、a加尾、衔接子连接、聚合酶链反应及其组合。
27.权利要求1-26中任一项所述的方法，还包括纯化所述消耗的样品溶液中的所述多个样品核酸分子。
28.权利要求27所述的方法，其中纯化所述消耗的样品溶液中的所述多个样品核酸分子包括从所述消耗的样品溶液中去除选自捕获引物核酸分子、酶及其组合的试剂。
29.权利要求1-28中任一项所述的方法，还包括对所述消耗的样品溶液中的核酸分子测序。
30.权利要求1-29中任一项所述的方法，其中所述多个样品核酸分子的通用衔接子核酸序列包含衔接子标签核酸序列。
31.权利要求30所述的方法，其中所述衔接子标签核酸序列限定独特...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·B·罗森伯格，C·若克，G·希莉格，
申请(专利权)人：华盛顿大学，
类型：发明
国别省市：
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