【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因编辑领域，更具体地，涉及多种sacas9核酸酶特异性的sgrna化学修饰方式以及靶向ttr基因序列。
技术介绍
1、crispr/cas9(clustered regularly interspaced short palindromicrepeats/crispr-associated protein 9)核酸酶在多种物种、不同的细胞中以及动物体内实现了有效的基因编辑。通过识别特定的pam序列及人工设计的sgrna(guide rna,grna)，cas9特异性地结合在基因组上的不同位置，使dna形成双链断裂(double strand breaks,dsb)，通过激活内源性的dna修复机制在缺口处产生插入、缺失从而达到基因敲除或敲入的目的。
2、cas9在细胞中的长时间表达可显著增加其脱靶效率，以rna形式递送实现瞬时表达可显著减少脱靶，提高安全性。
3、相比于广泛使用的spcas9，sacas9体积更小而切割活性相当，并且sacas9kkh变体的开发使sacas9的pam识别序列从“nng...
【技术保护点】
1.一种经修饰的saCas9 sgRNA，其特征在于，所述saCas9 sgRNA包含20至22个核苷酸长度的向导RNA和77个核苷酸长度的sgRNA骨架，并且所述saCas9 sgRNA的核苷酸序列包含至少一种化学修饰。
2.根据权利要求1所述的saCas9 sgRNA，其中，所述至少一种化学修饰选自2’-O-甲基修饰、2’-F修饰、2’-MOE修饰和硫代磷酸键的修饰中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的saCas9 sgRNA，其中，所述2’-O-甲基修饰、2’-F修饰或2’-MOE修饰存在于所述saCas9 sgRNA的5’末端和/或3...
【技术特征摘要】
1.一种经修饰的sacas9 sgrna，其特征在于，所述sacas9 sgrna包含20至22个核苷酸长度的向导rna和77个核苷酸长度的sgrna骨架，并且所述sacas9 sgrna的核苷酸序列包含至少一种化学修饰。
2.根据权利要求1所述的sacas9 sgrna，其中，所述至少一种化学修饰选自2’-o-甲基修饰、2’-f修饰、2’-moe修饰和硫代磷酸键的修饰中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的sacas9 sgrna，其中，所述2’-o-甲基修饰、2’-f修饰或2’-moe修饰存在于所述sacas9 sgrna的5’末端和/或3’末端各自的7个核苷酸中的至少1个、至少2个、至少3个或至少4个核苷酸上。
4.根据权利要求1所述的sacas9 sgrna，其中，所述2’-o-甲基修饰、2’-f修饰或2’-moe修饰存在于所述sacas9 sgrna的5’末端和/或3’末端各自的至少3个或至少4个核苷酸上。
5.根据权利要求1所述的sacas9 sgrna，其中，所述2’-o-甲基修饰、2’-f修饰或2’-moe修饰存在于所述sacas9 sgrna的第-14至-9、-3、-1、1、3至9、11至27、29至33、36至39、41、42、44至47、49至77位置的核苷酸中的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个核苷酸上。
6.根据权利要求5所述的sacas9 sgrna，其中，所述2’-o-甲基修饰、2’-f修饰或2’-moe修饰存在于所述sacas9 sgrna的第11-22和62-69位置的核苷酸中的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个核苷酸上。
7.根据权利要求6所述的sacas9 sgrna，其中，所述2’-o-甲基修饰、2’-f修饰或2’-moe修饰存在于所述sacas9 sgrna的第11-22位置的所有核苷酸上。
8.根据权利要求6所述的sacas9 sgrna，其中，所述2’-o-甲基修饰、2’-f修饰或2’-moe修饰存在于所述sacas9 sgrna的第62-69位置的所有核苷酸上。
9.根据权利要求6所述的sacas9 sgrna，其中，所述2’-o-甲基修饰、2’-f修饰或2’-moe修饰存在于所述sacas9 sgrna的第11-22和62-69位置的所有核苷酸上。
10.根据权利要求1所述的sacas9 sgrna，其中，所述硫代磷酸键的修饰存在于所述sacas9 sgrna的5’末端和/或3’末端各自的7个核苷酸中的至少2个、至少3个、至少4个或至少5个核苷酸之间。
11.根据权利要求10所述的sacas9 sgrna，其中，所述硫代磷酸键的修饰存在于所述sacas9 sgrna的5’末端和/或3’末端各自的至少4个或至少5个核苷酸之间。
12.根据权利要求1所述的sacas9 sgrna，其中，所述经修饰的sacas9sgrna是通过mod001-mod013方式进行修饰。
13.根据权利要求1所述的sacas9 sgrna，其中，所述sgrna骨架在5’至3’方向上依次包含重复序列/反向重复序列区、茎环1区、连接区和茎环2区。
14.根据权利要求1所述的sacas9 sgrna，其中，所述sacas9 sgrna还包含在3’末端的核苷酸序列uuuu。
15.一种靶向ttr的sacas9 sgrna，其特征在于，所述sacas9 sgrna包含在5’末端的向导rna，所述向导rna的序列是如seq id no：1-9中任一种所示的核苷酸序列的至少20个、至少21个、或全部22个连续核苷酸。
16.根据权利要求15所述的sacas9 sgrna，其中，所述向导rna的序列是如seq id n...
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