一种基于RAA-CRISPRCas12a的检测三文鱼中传染性鲑鱼贫血病毒的方法和应用技术

本发明专利技术涉及病毒检测技术领域，公开了一种基于RAA‑CRISPRCas12a的检测三文鱼中传染性鲑鱼贫血病毒的方法和应用，包括如下步骤：将Cas12a蛋白的溶液、向导RNA的溶液、ssDNA报告探针的溶液、核糖核酸酶抑制剂、无核酸酶水和RAA反应物分散在缓冲液中，孵育，进行荧光强度检测；所述Cas12a蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。本发明专利技术方法中使用了一种具有切割活性更好的新型Cas12a蛋白酶，能成功应用于检测三文鱼中传染性鲑鱼贫血病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及病毒检测，尤其涉及一种基于raa-crisprcas12a的检测三文鱼中传染性鲑鱼贫血病毒的方法和应用。

技术介绍

1、crispr-cas系统最初来源于细菌和古菌中的一种天然免疫机制，用于抵御外来遗传物质，如质粒和噬菌体的入侵。近年来，crispr-cas系统作为一种革命性的基因编辑技术，在生物科学领域引起了广泛关注。该技术以其简便、高效的特点，为基因编辑、基因调控和核酸检测等领域提供了强大的工具。该系统通过利用cas核酸酶与crrna的引导，实现对特定dna序列的识别和切割，具有极高的靶点特异性。crispr-cas检测技术作为一种新兴的检测手段，在病毒检测、疾病诊断、金属离子检测、真菌毒素检测等领域展现出巨大的应用潜力。

2、传染性鲑鱼贫血病毒(infectious salmon anaemia virus，isav)于1984年在挪威首次出现，是一种海洋病毒，主要感染大西洋鲑鱼(salmo salar)，可引起严重贫血、程度不同的出血和多组织坏死，是大西洋鲑鱼全身性和致死性的传染病。传染性鲑鱼贫血病毒是一种正粘病毒，直径1本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于RAA-CRISPRCas12a的检测三文鱼中传染性鲑鱼贫血病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述向导RNA的序列如SEQ ID NO.4所示；

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述孵育的温度为36℃-38℃，孵育时间为25min-35min；

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以体积计，Cas12a蛋白的溶液、向导RNA的溶液、ssDNA报告探针的溶液、核糖核酸酶抑制剂、无核酸酶水、RAA反应物和缓冲液的比为2:2:1:1:22:10:2；

5.根据权利要求1所...

【技术特征摘要】

1.一种基于raa-crisprcas12a的检测三文鱼中传染性鲑鱼贫血病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述向导rna的序列如seq id no.4所示；

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述孵育的温度为36℃-38℃，孵育时间为25min-35min；

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以体积计，cas12a蛋白的溶液、向导rna的溶液、ssdna报告探针的溶液、核糖核酸酶抑制剂、无核酸酶水、raa反应物和缓冲液的比为2:2:1:1:22:10:2；

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述raa反应物的制备方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴丽娜，黄和，耿阳阳，于海瑞，沈伟建，郭东升，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：