一种抗自切和高比活力糜蛋白酶突变体制造技术

本发明专利技术涉及一种抗自切和高比活力糜蛋白酶突变体，具体涉及通过分子改造和筛选获得糜蛋白酶的抗自切和高比活力突变体及其编码基因与应用，属于蛋白质和基因工程技术领域。本发明专利技术提供的糜蛋白酶突变体是在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的基础上发生至少一个以下位点的突变获得的：L97A、L162I、F71I、L83I、F114I、W207H。比原始酶相比，具有更好的抗自切性能及更高的比活力，相对于野生型糜蛋白酶，抗自切性能最高提高了82％，比酶活最高提高了37％，改善了糜蛋白酶储存和使用过程中容易自切降低活力的问题。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术涉及通过分子改造和筛选获得糜蛋白酶的抗自切和高比活力突变体及其编码基因与应用，属于蛋白质和基因工程。

技术介绍

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技术介绍
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1、糜蛋白酶(ec 3.4.21.1)也称为胰凝乳蛋白酶，属于丝氨酸蛋白酶家族，在食品加工、生物催化、生物技术和医药领域均有广泛的应用。糜蛋白酶可以酶解牛乳及乳制品中的酪蛋白，解决蛋白质致敏问题；糜蛋白酶能高效催化底物生成产物，既环保又简便；糜蛋白酶能作为消炎剂，减少因炎症引起组织损伤，也可用于治疗消化不良、营养缺乏和腹胀等症状，糜蛋白酶可以将蛋白质水解为肽段，是蛋白质组学分析中蛋白质处理的重要部分。

2、传统上糜蛋白酶主要从动物的胰脏中分离提取，来源和质量受到限制，多种胰腺蛋白酶性质相近，分离纯化困难且成本高。采用基因工程技术通过微生物重组表达和制备糜蛋白酶，可以提高其产量和纯度，降低分离难度和生产成本。动物来源蛋白可通过原核表达系统或真核表达系统表达。原核表达系统常用的宿主菌是大肠杆菌，其优势在于周期短、成本低以及表达载体选择多样化等，但同时也存在包涵体变性与蛋白复性难度大、纯化困难、目的蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种抗自切糜蛋白酶突变体，其特征在于，是在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的基础上发生以下突变中的至少一种：L97A、L162I、F71I、L83I、F114I、W207H。

2.权利要求1所述蛋白酶突变体的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于，如序列表SEQ ID NO.3、4、6、7、8、9所示。

4.一种包含权利要求2所述基因的重组载体或重组菌株。

5.如权利要求4述的重组载体，其特征在于，表达载体为pHBM905A、pPIC9K、pPIC9K-His、pPIC3.5K、pPIC9、pPICZαA、pAO81...

【技术特征摘要】

1.一种抗自切糜蛋白酶突变体，其特征在于，是在seq id no.1所示氨基酸序列的基础上发生以下突变中的至少一种：l97a、l162i、f71i、l83i、f114i、w207h。

2.权利要求1所述蛋白酶突变体的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于，如序列表seq id no.3、4、6、7、8、9所示。

4.一种包含权利要求2所述基因的重组载体或重组菌株。

5.如权利要求4述的重组载体，其特征在于，表达载体为phbm905a、ppic9k、ppic9k-his、ppic3.5k、ppic9、ppiczαa...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪彬，孙娜娜，李玉强，孙颖，于文娟，林雪，刘敦智，刘夫锋，路福平，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：