一种布鲁氏菌免疫抑制基因BtpB缺失疫苗及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种布鲁氏菌免疫抑制基因BtpB缺失疫苗及其制备方法和应用，属于疫苗株技术领域。本发明专利技术提供了一种敲除牛种布鲁氏菌A19疫苗株中BtpB基因的自杀质粒及基于所述自杀质粒制备得到基因缺失株，在布鲁氏菌A19株上进行BtpB基因缺失，以达到改造A19疫苗的目的。本发明专利技术构建得到的A19ΔBtpB缺失株会降低宿主脏器的损伤，能诱导小鼠产生高滴度的布鲁氏菌特异性抗体IgG，且能更好地诱导小鼠产生Th1型细胞因子，A19ΔBtpB缺失株能给小鼠提供比A19疫苗株更好的保护效力，A19ΔBtpB缺失株有望成为新型布鲁氏菌基因缺失疫苗候选物，为开发布鲁氏菌新型基因缺失疫苗提供理论基础和数据支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于疫苗株，具体涉及一种布鲁氏菌免疫抑制基因btpb缺失疫苗及其制备方法和应用。

技术介绍

1、布鲁氏菌病(brucellosis，简称“布病”)是一种全球性的人兽共患病，严重危害人类和哺乳动物的健康，同时也严重影响畜牧业发展。在我国的养牛产业中，布鲁氏菌对牛的危害十分严重。感染布鲁氏菌后，公牛会出现睾丸炎、附睾炎等症状，精子质量也会明显下降；母牛则可能会导致流产等症状。

2、目前，疫苗接种是防控布病重要手段之一，我国用于布鲁氏菌的疫苗主要有牛种布鲁氏菌a19菌株弱毒疫苗、羊种布鲁氏菌m5菌株弱毒疫苗、羊种布鲁氏菌rev.1弱毒疫苗和猪种布鲁氏菌s2菌株弱毒疫苗，在研发的疫苗主要有基因工程弱毒活疫苗和基因工程活载体疫苗等。其中基因工程弱毒活疫苗，是通过分子生物学方法，去掉布鲁氏菌的毒力基因，保留保护性的抗原，得到布鲁氏菌疫苗株。基因工程弱毒活疫苗安全性较高，并且可以用血清学或病原学来区分疫苗株还是野毒株的感染。目前研究表明，疫苗菌株的保护力和疫苗毒力有关，毒力越强保护力越好，所以在安全性和保护力方面要综合考虑。p>

3、布鲁氏本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种敲除牛种布鲁氏菌A19疫苗株中BtpB基因的自杀质粒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：分别克隆牛种布鲁氏菌A19疫苗株BtpB基因的上游同源臂基因、下游同源臂基因和卡那霉素抗性基因，以克隆得到的上游同源臂基因、下游同源臂基因和卡那霉素抗性基因的混合片段为模板进行第一扩增，以第一扩增的产物为模板进行第二扩增，得到含BtpB基因的上游同源臂基因、下游同源臂基因和卡那霉素抗性基因的融合片段；

2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，克隆牛种布鲁氏菌A19疫苗株BtpB基因的上游同源臂基因的引物对包括核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的B上-F和核苷酸序列如SEQ...

【技术特征摘要】

1.一种敲除牛种布鲁氏菌a19疫苗株中btpb基因的自杀质粒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：分别克隆牛种布鲁氏菌a19疫苗株btpb基因的上游同源臂基因、下游同源臂基因和卡那霉素抗性基因，以克隆得到的上游同源臂基因、下游同源臂基因和卡那霉素抗性基因的混合片段为模板进行第一扩增，以第一扩增的产物为模板进行第二扩增，得到含btpb基因的上游同源臂基因、下游同源臂基因和卡那霉素抗性基因的融合片段；

2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，克隆牛种布鲁氏菌a19疫苗株btpb基因的上游同源臂基因的引物对包括核苷酸序列如seq id no.1所示的b上-f和核苷酸序列如seq id no.2所示的b上-r；

3.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述第一扩增的模板，为扩增得到的上游同源臂基因、下游同源臂基因和卡那霉素抗性基因的等体积混合液。

4.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：马忠臣，陈创夫，王勇，徐朕宇，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：