一种基于光反应活性探针的修饰酶底物的鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种基于光反应活性探针的修饰酶底物的鉴定方法，具体涉及利用野生型修饰酶和突变型修饰酶对底物识别能力的不同而建立的方法。利用探针分别与野生型和突变型修饰酶进行反应，得到光反应活性的野生型和突变型修饰酶探针。将野生型和突变型修饰酶探针分别与生物样品进行孵育，之后进行光交联，分别富集交联的底物，通过定量比较野生型和突变型修饰酶探针富集的底物实现特异性地鉴定修饰底物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化学生物学研究方向底物鉴定研究领域，具体涉及通过对比野生型和突变型修饰酶探针富集底物的差异来特异性鉴定修饰底物的方法。

技术介绍

1、修饰酶介导的底物修饰在多种生物学过程中起重要的调控作用，因此有效地鉴定修饰酶的底物对于揭示修饰酶的调控机制具有重要意义。供体的类似物可以标记修饰酶的底物(文献1.wang,r.；zheng,w.h.；yu,h.q.；deng,h.t.；luo,m.k.,labeling substratesof protein arginine methyltransferase with engineered enzymes and matched s-adenosyl-l-methionine analogues.journal of the american chemical society,2011,133:7648-7651.)，但是大多数的修饰酶不能有效地利用类似物进行修饰，限制了其使用。亲和质谱技术(affinity purification coupled with mass spectrometry,ap-m本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于光反应活性探针的修饰酶底物的鉴定方法，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法的步骤为：

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，修饰酶可以为蛋白修饰酶、DNA修饰酶、RNA修饰酶等其中的一种或二种以上，但不限于这些修饰酶。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，将野生型修饰酶与底物结合的活性中心(野生型修饰酶中能够直接与底物相结合，并催化底物化学反应的部位；活性中心分为结合部位，结合底物的部分，催化部位，催化底物化学反应的部位；突变结合部位的氨基酸残基，野生型修饰酶失去结合底物的能力)上的1-3个氨基酸...

【技术特征摘要】

1.一种基于光反应活性探针的修饰酶底物的鉴定方法，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法的步骤为：

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，修饰酶可以为蛋白修饰酶、dna修饰酶、rna修饰酶等其中的一种或二种以上，但不限于这些修饰酶。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，将野生型修饰酶与底物结合的活性中心(野生型修饰酶中能够直接与底物相结合，并催化底物化学反应的部位；活性中心分为结合部位，结合底物的部分，催化部位，催化底物化学反应的部位；突变结合部位的氨基酸残基，野生型修饰酶失去结合底物的能力)上的1-3个氨基酸残基突变(将野生型修饰酶结合部位的1-3个氨基酸变成其它与其不同的氨基酸)，优先选择不破坏修饰酶的空间构象的突变。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，探针包含反应基团、连接子、光反应基团和富集基团；反应基团、光反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶明亮，刘震，王科云，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：