一种提高CD8+T细胞免疫反应的肠炎沙门菌的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种提高CD8+T细胞免疫反应的肠炎沙门菌的构建方法，所构建的肠炎沙门菌通过向减毒的肠炎沙门菌rSC0152染色体中引入SteD效应蛋白编码基因缺失，改变细菌的胞内存活方式，从SCVs逃逸向胞质的细菌数目增多，并诱导抗原呈递细胞表面的MHC I类分子水平，且显著提高菌株诱导的CD8+T细胞免疫反应；进一步引入asdA基因缺失，构建平衡致死系统，递送猪肺炎支原体Mhp的热休克P42蛋白后，同样可诱导升高的抗原特异性免疫应答，特别是诱导了高水平的CD8+T细胞免疫应答，并可在Mhp菌株F66攻毒后改善小鼠体重，减轻鼻部症状和肺部病理组织变化。本发明专利技术为提高沙门菌载体疫苗诱导的的CD8+T细胞免疫应答提供了一种新的策略，具有较大的市场应用潜力和潜在的经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提高cd8+ t细胞免疫反应的肠炎沙门菌的构建方法及其应用，属于动物细菌基因工程。

技术介绍

1、由于操作方式简便和成本低的优势，沙门菌载体疫苗相较于传统疫苗显示出良好的前景。口服免疫后，沙门菌载体疫苗可以诱导黏膜表面的局部免疫反应，以防止病原体定殖或穿过黏膜表面引发感染。另一方面，沙门菌因其侵袭性，能够进入宿主的肠道相关淋巴结组织，肝脾等内脏器官，并在相应位置表达外源抗原，激发针对载体和外源抗原的特异性免疫，也一并赋予了沙门菌最大的诱发持久性免疫的潜力。但研究表明，沙门菌携带外源抗原蛋白时诱导的细胞免疫应答以cd4+ t细胞免疫应答为主，但却仅能诱导有限的cd8+ t细胞免疫应答。

2、研究表明，细菌通过吞噬作用进入抗原呈递细胞后，若能够从吞噬体区室逃逸，直接进入细胞胞质溶胶，载体递送的蛋白质就可被视为内源性抗原，与mhc i类分子结合后呈现在细胞表面，并产生强烈的cd8+ t细胞介导的免疫反应。相比之下，沙门菌传递的蛋白质缺乏吞噬体逃逸机制，主要存在于含沙门菌的液泡(scvs)内，被视为外源性抗原并由mhcii类分子呈递，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高CD8+T细胞免疫反应的肠炎沙门菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中用于扩增所述的Cat基因片段的引物序列如SEQ ID NO.3～4所示。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中用于扩增所述的Cat基因片段的引物序列如SEQ ID NO.5～6所示。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，扩增Cat基因片段的PCR程序为98℃5min；94℃40sec，55℃15sec，72℃30sec，30cycles；72℃10min，4℃保存。

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【技术特征摘要】

1.一种提高cd8+t细胞免疫反应的肠炎沙门菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中用于扩增所述的cat基因片段的引物序列如seq id no.3～4所示。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中用于扩增所述的cat基因片段的引物序列如seq id no.5～6所示。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，扩增cat基因片段的pcr程序为98℃5min；94℃40sec，55℃15sec，72℃30sec，30cycles；72℃10min，4℃保存。

5.权利要求1～3任一项所述的构建方法构建得到的肠炎沙门菌在制备疫苗中的应用。

6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：石火英，周国栋，马琦丰，赵钰莹，侯新东，李权，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：