一种实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法技术

技术编号:43903685 阅读:33 留言:0更新日期:2025-01-03 13:14
本发明专利技术属于荧光染色技术领域,具体涉及一种实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法。该方法包括如下步骤:使用亲脂性碳菁类染料配制的染色液对微孢子虫的成熟孢子进行染色;将微孢子虫的成熟孢子接种至正在培养的宿主细胞中进行感染,获得活细胞样品;在感染后的5小时~120小时,使用激光共聚焦显微镜对所述活细胞样品进行观察。本发明专利技术提供的该方法解决了基于转基因技术示踪微孢子虫侵染与胞内发育过程的难题,填补了实时示踪微孢子虫胞内增殖发育全过程的空缺,替代了传统基于细胞固定和通透的双色或多色荧光染色步骤标记不同增殖时期微孢子虫的复杂方法,操作简单,便于观察,适用所有属种微孢子虫。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于荧光染色,具体涉及一种实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法


技术介绍

1、微孢子虫是一类专性细胞内的寄生虫,全球已报道约220个属,1700余种,且每年都有新的物种被报道。微孢子虫的宿主范围和分布极为广泛,能感染几乎所有的无脊椎动物和脊椎动物,如人,兔,家蚕,蜜蜂和蟹。部分微孢子虫是人类、畜牧、水产与家蚕、蜜蜂的经济昆虫的重要病原生物,给人类健康与经济发展造成了严重损失,但迄今缺乏有效防控微孢子虫病的手段。作为胞内病原,对微孢子虫成熟孢子侵染宿主细胞及其后在胞内增殖发育过程与适应胞内生存的机制了解的缺乏是阻碍发展微孢子虫病防控措施的重要瓶颈。而在微孢子虫细胞生物学及其与宿主相互作用的研究中,标记微孢子虫的入胞与胞内增殖发育过程对揭示微孢子虫的胞内适应性生存机制有重要意义。当前,受限于微孢子虫遗传操作技术的缺乏,基于转基因技术利用特异性强启动子驱动gfp等荧光标记基因表达,以获得稳定荧光示踪的微孢子虫株,仍然是一个尚未涉足的领域。

2、目前,常用的细胞内微孢子虫的标记方法包括免疫学方法和荧光染色方法。免疫学方法常基于抗原和抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法,其特征在于,包括如下步骤:

2.根据权利要求1所述的实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法,其特征在于,所述亲脂性碳菁类染料配制的染色液的终浓度为5μM。

3.根据权利要求1所述的实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法,其特征在于,所述染色的时间为10min。

4.根据权利要求1所述的实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法,其特征在于,所述染色后的微孢子虫的成熟孢子的获得方法,包括如下步骤:

5.根据权利要求4所述的实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法,其特征在于,离心的...

【技术特征摘要】

1.一种实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法,其特征在于,包括如下步骤:

2.根据权利要求1所述的实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法,其特征在于,所述亲脂性碳菁类染料配制的染色液的终浓度为5μm。

3.根据权利要求1所述的实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法,其特征在于,所述染色的时间为10min。

4.根据权利要求1所述的实时示踪胞内微孢子虫增殖发育的荧光标记方法,其特征在于,所述染色后的微孢子虫的成熟孢子的获得方法,包括如下步骤:

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【专利技术属性】
技术研发人员:周敏章晋勇薛思佳信召哲孟丽慧
申请(专利权)人:青岛农业大学
类型:发明
国别省市:

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