一种蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白及其制备方法和应用，具体地，本发明专利技术通过CRISPR‑Cas9介导的基因编辑手段，在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)菌株中对蛋白酶体相关基因进行编辑，对翻译延伸因子eEF2的磷酸化修饰位点T57和T59进行突变，可以在有效提高细胞提取物的体外蛋白质表达活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体地，涉及一种蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白及其制备方法和应用。

技术介绍

1、无细胞蛋白质合成(cell-free protein synthesis,cfps)是一种以外源mrna或dna为模板，在体外条件下的使用酶、氨基酸底物和能量来合成蛋白质的技术。与传统的体内重组表达系统相比，体外无细胞合成系统具有多种优点，如能够直接以pcr产物作为模板同时平行合成多种蛋白质，可开展高通量多肽或蛋白质类药物筛选，此外，体外无细胞合成系统在表达对细胞有毒害作用的多肽或蛋白质的应用方面也具有独特优势。无细胞蛋白质表达系统是基于细胞的蛋白质表达系统的重要补充。

2、现有的无细胞蛋白质合成体系主要可以分为两类：其一是将获得的纯化的蛋白质合成所需的核糖体、酶、trna等按一定的比例进行组合复配，使其获得体外表达蛋白质的能力，即纯化的无细胞蛋白质表达系统(pure)。该系统具有清晰的组分信息，可以方便地、定制化地对配方进行调整以获得不同的蛋白质表达特性，但缺点是制备工艺流程复杂且成本高昂；另一类则是从具有蛋白质表达活性的活体细胞的提取物中获得主本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，通过对蛋白酶翻译延伸因子的磷酸化修饰位点中一个或多个苏氨酸位点进行突变获得，突变后可以提高蛋白质表达活性，优选地，所述翻译延伸因子为eEF2。

2.如权利要求1所述的蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，所述苏氨酸各自独立地突变为不含羟基的氨基酸。

3.如权利要求2所述的蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，所述苏氨酸可各自独立地突变为丙氨酸(A)、结氨酸(V)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)、色氨酸(W)、苯丙氨酸(F)、天冬酰胺(D)或其组合。

4.如权利要求3所述的...

【技术特征摘要】

1.一种蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，通过对蛋白酶翻译延伸因子的磷酸化修饰位点中一个或多个苏氨酸位点进行突变获得，突变后可以提高蛋白质表达活性，优选地，所述翻译延伸因子为eef2。

2.如权利要求1所述的蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，所述苏氨酸各自独立地突变为不含羟基的氨基酸。

3.如权利要求2所述的蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，所述苏氨酸可各自独立地突变为丙氨酸(a)、结氨酸(v)、异亮氨酸(i)、亮氨酸(l)、甲硫氨酸(m)、半胱氨酸(c)、色氨酸(w)、苯丙氨酸(f)、天冬酰胺(d)或其组合。

4.如权利要求3所述的蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，所述的蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白是源自酵母，所述酵母优选为克鲁维酵母，更优为乳酸克鲁维酵母。

5.如权利要求1所述的蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，对应如seq idno.1所示的序列中的选自下组的一个或多个苏氨酸发生所述突变：

6.如权利要求5所述的蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，所述的第57位苏氨酸(t)突变为选自下组中的一种或多种氨基酸：丙氨酸(a)、结氨酸(v)、异亮氨酸(i)、亮氨酸(l)、甲硫氨酸(m)、半胱氨酸(c)、色氨酸(w)、苯丙氨酸(f)、天冬酰胺(d)或其组合；和/或，

7.如权利要求5所述的蛋白酶翻译延伸因子突变蛋白，其特征在于，所述的突变包含选自下组的突变：t57a、t57c、t57f、t57v、t...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，熊亮，付欢欢，曹欣茹，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：