【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别涉及一种同时扩增人41个y str基因座的六色荧光标记试剂盒及其应用。
技术介绍
1、短串联重复序列(short tandem repeat，str)或简答串联重复序列，是一类广泛存在于人类基因组中的长度多态性遗传标记。str遗传标记在个体间差异大、多态性高、扩增片段较小，尤其适用于一些微量或降解检材。因此，基于str的扩增检测技术被广泛应用于法医个体识别、亲权鉴定、群体遗传学分析及人类dna数据库的构建等。
2、y染色体str遗传标记是指存在于人类y染色体非重组区域的短串联重复序列。y染色体str遗传标记具有男性特有、父系遗传及单倍型遗传三大特征，将其独特性与str位点分型检测的优越性相结合，可进行法医学个体识别、亲子鉴定及dna家谱构建等。
3、荧光标记技术是利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简便等优点，使得荧光标记物在许多研究领域的应用日趋广泛。六色荧光标记即指蓝、绿、黄、红、紫(引物标记)与橙(分子量内标标记)。
4、相近似的实现方法：通过设计引物对，每对引物特异性扩增1个y-str基因座。通过将这些引物对混合，一次性扩增多个y-str基因座，同时不会产生非特异性扩增。扩增结束后通过毛细管电泳检测扩增结果。过程中，利用不同引物对的加入浓度不同，控制每个基因座峰高的高低，达到同一荧光标记颜色中，最低峰/最高峰比值≥0.5；不同荧光标记颜色中，最低平均峰高/最高的平均峰高≥0
5、a)市面上大部分的y-str案件试剂盒检测的基因座较少；
6、b)市面上大部分y-str案件试剂盒灵敏度低，微量样本检测效果差；
7、c)市面上大部分y-str案件试剂盒抗抑制能力差；
8、d)市面上大部分y-str案件试剂盒无内部质控，无法评估样本质量与扩增过程是否正常。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供的一种同时扩增人41个y str基因座的六色荧光标记试剂盒及其应用，同时扩增的基因座数量多、特异性强、灵敏度高、抗抑制能力强，同时包含内部质控用于评估样本质量与扩增过程。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了引物组，包括引物对x；
4、所述引物对x中的上游引物具有：
5、(1)、如seq id no:(2x-1)所示的核苷酸序列；或
6、(2)、如(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(1)的相同或相似；或
7、(3)、与如(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
8、所述引物对x中的下游引物具有：
9、(4)、如seq id no:(2x)所示的核苷酸序列；或
10、(5)、如(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(4)的相同或相似；或
11、(6)、与如(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
12、x选自1～38中的任意整数；
13、所述多个为2个至5个。
14、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述引物组包括引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4和引物组合5；
15、所述引物组合1包括引物对1～8；
16、所述引物组合2包括引物对9～16；
17、所述引物组合3包括引物对17～23；
18、所述引物组合4包括引物对24～30；
19、所述引物组合5包括引物对31～38；
20、每个引物组合中的每个引物对的上游引物和/或下游引物具有荧光标记，且引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4和引物组合5中的荧光标记均不相同。
21、本专利技术还提供了引物组在如下任意项中的应用：
22、(i)、制备检测y-str基因座的试剂或试剂盒；
23、(ii)、检测y-str基因座；
24、所述y-str基因座包括dys393、dys390、dys447、dys391、dys527a/b、dys596、dys645、dys576、dys635、dys392、dyf387s1a/b、dys643、dys533、dys593、dys456、dys549、dys19、dys385a/b、dys557、dys518、dys522、dys460、dys389i、dys570、dys389ii、dys449、dys458、dys444、dys437、dys438、dys439、ygatah4、dys448、dys627、dys481、rs771783753、rs759551978和rs199815934。
25、本专利技术还提供了试剂，包括上述引物组，以及可接受的辅料或助剂。
26、本专利技术还提供了试剂盒，包括上述引物组或上述试剂，以及可接受的辅料或助剂。
27、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒还包括pcr反应预混液；
28、所述pcr反应预混液包括taq dna聚合酶、tris缓冲液、kcl、mgcl2、(nh4)2so4、dntps和bsa；
29、所述pcr反应预混液以去离子水为溶剂。
30、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒中：
31、引物对1、引物对2、引物对5、引物对9、引物对10、引物对12～14、引物对18、引物对25、引物对33或引物对36中的上游引物或下游引物的终浓度为0.1～0.4μm；
32、引物对3、引物对6、引物对16、引物对17、引物对19～24、引物对26～29、引物对31、引物对34、引物对35或引物对37中的上游引物或下游引物的终浓度为0.2～0.5μm；
33、引物对4中的上游引物或下游引物的终浓度为1.3～1.6μm；
34、引物对7、引物对8、引物对11或引物对38中的上游引物或下游引物的终浓度为0.3～0.6μm；
35、引物对15中的上游引物或下游引物的终浓度为0.4～0.7μm；
36、引物对30或引物对32中的上游引物或下游引物的终浓度为0.6～0.9μm。
37、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒的扩增程序为：95℃预变性1min；95℃
38、变性10s、60℃退火延伸90s，28个循环；60℃终延伸10min；4℃保存。
39、本专利技术还提供了检测y-str基因座的方法，基于如下任一项检测待测样本：
40、(i)、上述引物组；
41、(ii)、上述试剂；
42、(iii)、上述试剂盒。
43、在本本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.引物组，其特征在于，包括引物对X；
2.如权利要求1所述的引物组，其特征在于，包括引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4和引物组合5；
3.如权利要求1或2所述的引物组在如下任意项中的应用：
4.试剂，其特征在于，包括如权利要求2所述的引物组，以及可接受的辅料或助剂。
5.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2所述的引物组或如权利要求4所述的试剂，以及可接受的辅料或助剂。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包括PCR反应预混液；
7.如权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于：
8.如权利要求5至7任一项所述的试剂盒，其特征在于，扩增程序为：95℃预变性1min；
9.检测Y-STR基因座的方法，其特征在于，基于如下任一项检测待测样本：
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，包括：
【技术特征摘要】
1.引物组，其特征在于，包括引物对x；
2.如权利要求1所述的引物组，其特征在于，包括引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4和引物组合5；
3.如权利要求1或2所述的引物组在如下任意项中的应用：
4.试剂，其特征在于，包括如权利要求2所述的引物组，以及可接受的辅料或助剂。
5.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2所述的引物组或如权利要求4所述的试剂，以...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕万里，刘旭，伏东科，沙洁，
申请(专利权)人：苏州新海生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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