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提高岩藻多糖酶酶活的突变体及其应用制造技术

技术编号:43881966 阅读:57 留言:0更新日期:2024-12-31 19:06
本发明专利技术公开了提高岩藻多糖酶酶活的突变体及其应用,属于分子生物学中的基因工程和酶工程技术领域。本发明专利技术利用定点突变技术对已知岩藻多糖酶基因进行分子改造,得到了突变体酶L46R、Y290F、D361T、N374D、L46R/Y290F、D361T/N374D、L46R/Y290F/N374D,本发明专利技术提供的系列突变体的催化酶活较原始菌增加了1.4‑2.67倍,可应用于岩藻低聚糖的制备,具有潜在的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种酶活和热稳定性提高的岩藻多糖酶突变体,属于基因工程和酶工程。


技术介绍

1、岩藻多糖酶(ec 3.2.1.212)来源广泛,主要来源于海洋细菌,其次是无脊柱生物和海洋真菌,各种酶之间的酶学性质差异较大。岩藻多糖酶的作用类型有内切型和外切型;目前,发现的岩藻多糖酶主要为内切型。

2、随着研究的深入,发现低分子量岩藻多糖具有更好的水溶解性和生物活性。制备低分子量岩藻多糖的方法主要有3种,化学法、物理法和酶水解法;由于酶水解法更温和,不损害产物岩藻低聚糖的生物活性,可以应用于岩藻低聚糖的生产。

3、而目前发现的岩藻多糖酶的酶活没有很突出,导致工业应用效果不佳,因此催化效率有待进一步提升。


技术实现思路

1、为解决上述现有问题,本专利技术通过对mariniflexilefucanivorans来源的α-1,4-岩藻多糖酶基因(核苷酸序列如seq id no.1所示,氨基酸序列如seq id no.2所示)进行分子改造,运用定点突变技术获得比酶活和热稳定性显著提高的α-1,4-本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种α-1,4-岩藻多糖酶突变体,其特征在于,所述突变体是将α-1,4-岩藻多糖酶亲本的第46位亮氨酸、第290位酪氨酸、第361位天冬氨酸和第374位天冬酰胺中的一个或多个进行突变,所述亲本的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的突变体,其特征在于,所述突变体是对所述亲本进行(a)或(b)所示的突变:

3.编码权利要求1或2所述突变体的基因。

4.携带有权利要求3所述基因的重组质粒。

5.表达有权利要求1或2所述突变体,或者含有权利要求3所述基因,或者转化有权利要求4所述重组质粒的重组微生物细胞。

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【技术特征摘要】

1.一种α-1,4-岩藻多糖酶突变体,其特征在于,所述突变体是将α-1,4-岩藻多糖酶亲本的第46位亮氨酸、第290位酪氨酸、第361位天冬氨酸和第374位天冬酰胺中的一个或多个进行突变,所述亲本的氨基酸序列如seq id no.2所示。

2.根据权利要求1所述的突变体,其特征在于,所述突变体是对所述亲本进行(a)或(b)所示的突变:

3.编码权利要求1或2所述突变体的基因。

4.携带有权利要求3所述基因的重组质粒。

5.表达有权利要求1或2所述突变体,或者含有权利要求3所述基因,或者转化有权利要求4所述重组质粒的重组微生物细胞。

6.一种提高α-1,4-岩藻多糖酶酶活的方法,其特征在于,所述方法是将氨基酸序列如seq id no.2所示的α-1,4-岩藻多糖酶的第46位亮氨酸、第290位酪氨酸、第361位天冬氨酸、第374位天冬酰胺进行突变。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述方法是将氨基酸序列如seq id no.2所示的α-1,4-岩藻多糖酶的第46位亮氨酸突变为精氨酸;或将第290位酪氨酸突变为苯丙氨酸...

【专利技术属性】
技术研发人员:张涛陈慧琳李梦丽
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:

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