一种基于磁分离的滚环扩增超灵敏检测GSK3β的方法技术

本发明专利技术涉及基于磁分离的滚环扩增超灵敏检测GSK3β的方法，可有效解决目前检测患者体液中某蛋白质表达的常用方法是Elisa法，该方法的不足之处在于信号放大能力不足，检测灵敏度有限的问题，其解决的技术方案是，包括以下步骤：1)制备抗体修饰磁珠；2)制备SH‑DNA修饰抗体；3)滚环扩增RCA反应；4)GSK3β蛋白检测；本发明专利技术可以实现多重蛋白检测，通过滚换扩增的原理进行患者标本中GSK3β的超灵敏检测，极大地提高了检测灵敏度，可达fg级(fg/ml)；而市面上所使用的elisa检测试剂盒，包括国外知名品牌如Abcam,cell signalling，Invitrogen，均未达到ng/ml，且本发明专利技术方法可以使用多种检测方式：如酶标仪、激光共聚焦、流式，是检测GSK3β的方法上的创新。

【技术实现步骤摘要】

一、本专利技术涉及生物医药，特别是一种基于磁分离的滚环扩增超灵敏检测gsk3β的方法。

技术介绍

0、二、
技术介绍

1、糖尿病肾脏疾病(dkd)是指由糖尿病所致的慢性肾脏疾病(ckd)，通常是根据尿白蛋白升高和/或估算的肾小球滤过率下降，同时排除其他ckd而做出的临床诊断。dkd的临床特征为逐渐进展的蛋白尿、渐进性肾功能下降，晚期出现严重肾衰竭，是糖尿病患者的主要死亡原因之一。单一的筛查指标判断肾脏是否存在损伤可能存在一些缺陷，因此临床中应结合多种辅助检查方法来综合判断。同时应该增强对糖尿病肾脏损伤的重视程度，规范对糖尿病肾脏损伤的评估，加强dkd的早期预测与诊断。

2、目前，临床上dkd的诊断依赖于肾功能的评估，通常通过计算估计的肾小球滤过率(egfr)和对肾损伤进行评估，评估肾损伤通常通过检查随机尿样中的尿白蛋白与肌酐比值。

3、使用egfr作为dkd早期诊断的标志物存在一些潜在缺陷。首先，血清肌酐水平受肌肉质量和饮食模式(尤其是肉类摄入量)的影响，可能会干扰egfr的计算。其次，在某些情况下，所使用的公式也可能导致本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于磁分离的滚环扩增超灵敏检测GSK3β的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于磁分离的滚环扩增超灵敏检测GSK3β的方法，其特征在于，所述的环模板单链序列为:ATACAATAGGACTCAATTCTGCTAACCCGCCCTACCCAATATCTTCACCTCGCATACAGTCCGGGG，如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的基于磁分离的滚环扩增超灵敏检测GSK3β的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

4.权利要求1-3任一项方法得到的RCA产物在制备检测GSK3β蛋白试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】

1.一种基于磁分离的滚环扩增超灵敏检测gsk3β的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于磁分离的滚环扩增超灵敏检测gsk3β的方法，其特征在于，所述的环模板单链序列为:atacaataggactcaattctgctaacccgccctacccaatatct...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭佳，刘章锁，张开翔，王慧，厉研菲，张艳梅，燕禹帆，毛子慧，陈崭，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：