【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学的，尤其涉及一种b家族dna聚合酶突变体及其构建方法和应用。
技术介绍
1、dna聚合酶是pcr扩增技术中的关键物质。目前最常被使用的dna聚合酶包括pfudna聚合酶、taq dna聚合酶和b家族dna聚合酶等。其中，b家族dna聚合酶属于b家族dna聚合酶，其是从生活在温度更高的极端环境的菌株中分离得到的同时具有dna合成酶活性和3’-5’核酸外切酶活性的酶分子，其兼具较为良好的扩增性能、耐热性能和保真性能。
2、但是，现有b家族dna聚合酶对于蛋白质、多糖等抑制成分的耐受能力差，导致pcr扩增受到抑制，具有较大的局限性。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种b家族dna聚合酶突变体，该b家族dna聚合酶突变体在具有优秀的扩增性能和保真性能的同时，也具有良好的抗抑制性能，能够很好地被应用于dna的体外扩增中，尤其是对于复杂样本也具有优秀的扩增效果，应用前景良好。
2、本专利技术的第二目的在于提供上述b家族dna聚合酶突变体的
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1.一种B家族DNA聚合酶突变体，其特征在于，与氨基酸序列如SEQ ID NO:1所述的B家族DNA聚合酶4K8Z相比，所述B家族DNA聚合酶突变体包括E134K突变、E154A突变、Y291S突变和K317E突变中的两种或多种。
2.根据权利要求1所述的B家族DNA聚合酶突变体，其特征在于，所述B家族DNA聚合酶突变体包括E134K突变、Y291S突变和K317E突变。
3.根据权利要求1所述的B家族DNA聚合酶突变体，其特征在于，所述B家族DNA聚合酶突变体包括E154A突变、Y291S突变和K317E突变。
4.权利要求1～3...
【技术特征摘要】
1.一种b家族dna聚合酶突变体，其特征在于，与氨基酸序列如seq id no:1所述的b家族dna聚合酶4k8z相比，所述b家族dna聚合酶突变体包括e134k突变、e154a突变、y291s突变和k317e突变中的两种或多种。
2.根据权利要求1所述的b家族dna聚合酶突变体，其特征在于，所述b家族dna聚合酶突变体包括e134k突变、y291s突变和k317e突变。
3.根据权利要求1所述的b家族dna聚合酶突变体，其特征在于，所述b家族dna聚合酶突变体包括e154a突变、y291s突变和k317e突变。
4.权利要求1～3任意一项所述的b家族dna聚合酶突变体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：s1、取所述b家族dna聚合酶4k8z的编码基因与质粒载体进行重组处理，得到重组质粒；取突变引物对所述重组质粒进行定点突变，得到所述构建体；s2、取所述构建体对宿主细胞进行导入处理，得到表达菌株；s3、取所述表达菌株进行诱导表达和纯化处理，得到所述b家族dna聚合酶突变体。
【专利技术属性】
技术研发人员：产竹华，曾润颖，易志伟，马伟航，
申请(专利权)人：自然资源部第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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