检测影响β-地中海贫血表型的多种修饰基因变异的引物组、试剂盒和方法技术

本发明专利技术涉及一种检测影响β‑地中海贫血(简称β‑地贫)表型的多种修饰基因变异的引物组、方法和试剂盒。其中所述方法包括以下步骤：(1)采集模块：获得和制备受试者样本；(2)扩增模块：长片段多重PCR扩增所述样本中BCL11A、ZBTB7A、KLF1、HBS1L‑MYB、GATA1、HBG1/2、HBBP1、GATAD2A、DNMT1和CHD4；(3)文库构建模块：构建单分子长读长测序文库；(4)测序模块：测序并分析基因变异类型。其中所述试剂盒包括以下试剂：(1)用于长片段多重PCR扩增的试剂；和(2)用于构建单分子长读长测序文库的试剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用单分子长读长测序平台检测影响β-地中海贫血表型的多种修饰基因变异的引物组和方法，以及适用于此方法的试剂盒。

技术介绍

1、β-地中海贫血(β-地贫)是由于表达β-珠蛋白的基因hbb缺陷导致的β-珠蛋白合成障碍的溶血性贫血，是世界上最常见的单基因隐性遗传病之一，也是我国长江以南各省区发病率最高的一种遗传病[1-3]。β-地贫在临床上具有宽泛的表型变异谱，在hbb基因型相同或类似的情况下，患者的临床表型严重程度可能会有差异[4]。影响β-地贫表型异质性的原因主要有两个：α-地中海贫血(α-地贫)基因(hba1/2)型和胎儿血红蛋白(hemoglobin f，hbf)的表达。α-地贫基因变异导致的α-珠蛋白减少或增加会影响β-珠蛋白合成障碍导致α/β-珠蛋白不平衡，从而影响β-地贫患者的表型[5]。hb f由α-珠蛋白和hbg1/2基因编码的γ-珠蛋白组成，妊娠5周开始在肝脏中表达，在胎儿6个月时含量超过90％，在出生前后迅速减少，到2岁时一般表达量低于1％。但在部分成年人中存在γ-珠蛋白高表达导致hb f升高的现象，称为遗传性持续性胎儿血本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于同时长片段多重PCR扩增β-地贫修饰基因相关片段中的多种变异引物组，覆盖以下基因或基因间区：BCL11A、ZBTB7A、KLF1、HBS1L-MYB、GATA1、HBG1/2、HBBP1、GATAD2A、DNMT1和CHD4；

2.根据权利要求1所述的引物，其中所述引物可在5’端加上5-50nt不同序列的DNA，即DNA条形码，用于区分不同样本。

3.根据权利要求1所述的引物，其中所述引物可用于检测扩增产物片段内的不同突变是否连锁。

4.一种可检测多个地中海贫血修饰基因的多种突变的引物的试剂盒，包括以下试剂：

>5.根据权利要求4...

【技术特征摘要】

1.一种用于同时长片段多重pcr扩增β-地贫修饰基因相关片段中的多种变异引物组，覆盖以下基因或基因间区：bcl11a、zbtb7a、klf1、hbs1l-myb、gata1、hbg1/2、hbbp1、gatad2a、dnmt1和chd4；

2.根据权利要求1所述的引物，其中所述引物可在5’端加上5-50nt不同序列的dna，即dna条形码，用于区分不同样本。

3.根据权利要求1所述的引物，其中所述引物可用于检测扩增产物片段内的不同突变是否连锁。

4.一种可检测多个地中海贫血修饰基因的多种突变的引物的试剂盒，包括以下试剂：

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，可检多个β-地贫修饰基因多种变异，所述突变至少包括：hbg1和hbg2基因重组导致的大片段缺失和重复，以及如表2所示的至少109种点突变。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于检测同一扩增片...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐湘民，叶宇华，毛爱平，谢田田，孟万利，詹嘉晗，李佳琪，任志林，
申请(专利权)人：福建贝瑞检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：

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