一种携带EGFP标签的鸡贫血病毒全长基因感染性克隆质粒构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种携带EGFP标签的鸡贫血病毒全长基因感染性克隆质粒构建方法及其应用，属于病毒基因工程技术领域。本发明专利技术利用反向遗传技术将CAV的环状基因组线性化，通过无缝克隆的方法，将线性化后的CAV基因组与克隆载体pcDNA3.1(+)连接，成功构建了CAV全长感染性克隆pcDNA3.1‑CAV和携带EGFP标签的CAV全长感染性克隆pcDNA3.1‑CAV‑EGFP；并且在MDCC‑CU147细胞上实现体外病毒拯救，在SPF鸡体内实现与CAV一致的致病性。本发明专利技术提供了一种简单、快捷的CAV反向遗传学操作系统，成功获得携带EGFP绿色荧光蛋白基因的CAV。本发明专利技术对于CAV致病机制和病毒复制机制研究、CAV疫苗和诊断试剂研发等方面具有广泛的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及病毒基因工程，具体涉及一种携带egfp标签的鸡贫血病毒全长基因感染性克隆质粒构建方法及其应用。

技术介绍

1、鸡贫血病毒(chicken anemia virus，cav)属于指环病毒科(anelloviridae)家族的圆圈病毒(gyrovirus)属。cav是单股负链dna病毒，其基因组分为单股、环形、共价连接的闭合dna，基因组约由2319bp个碱基组成，包括三个开放阅读框(orf)，分别为1350bp、609bp和366bp，对应编码vp1、vp2、vp3三种蛋白。cav感染会导致鸡产生贫血和免疫抑制，因此，该病毒对全球家禽业产生了重大的经济影响。鸡群感染cav引起传染性贫血后，通常会表现为精神沉郁，消瘦，喜卧，厌食，羽毛蓬松杂乱，缩颈呆立，生长发育迟缓，鸡冠、肉髯、黏膜苍白，处于产蛋期鸡群产蛋率下降，有时排出黄绿色粪便。有些病鸡的皮肤会发生程度不同的局部点状出血，大多数可见于翅膀处，有时可见于头颈、尾部、胸部、腹部以及腿部，症状严重时皮肤变成蓝紫色，并发生破损，有液体渗出，影响生长发育；整个病程较长，大约维持7～30d，病死率为5％本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种携带EGFP标签的CAV全长基因感染性克隆质粒，其特征在于，真核表达载体pcDNA3.1(+)和CAV线性全基因组连接，构建的CAV全基因重组质粒pcDNA3.1-CAV的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的携带EGFP标签的CAV全长基因感染性克隆质粒，其特征在于，所述的CAV全长基因感染性克隆质粒由CAV全基因重组质粒pcDNA3.1-CAV和带有Kozak序列的EGFP基因组成，EGFP基因的插入位点位于CAV的第1996和1997个核苷酸之间。

3.根据权利要求2所述的携带EGFP标签的CAV全长基因感染性克隆质粒，其...

【技术特征摘要】

1.一种携带egfp标签的cav全长基因感染性克隆质粒，其特征在于，真核表达载体pcdna3.1(+)和cav线性全基因组连接，构建的cav全基因重组质粒pcdna3.1-cav的核苷酸序列如seq id no.4所示。

2.根据权利要求1所述的携带egfp标签的cav全长基因感染性克隆质粒，其特征在于，所述的cav全长基因感染性克隆质粒由cav全基因重组质粒pcdna3.1-cav和带有kozak序列的egfp基因组成，egfp基因的插入位点位于cav的第1996和1997个核苷酸之间。

3.根据权利要求2所述的携带egfp标签的cav全长基因感染性克隆质粒，其特征在于，cav全长基因感染性克隆质粒的核苷酸序列如seq id no.8所示。

4.根据权利要求1所述的携带egfp标签的cav全长基因感染性克隆质粒，其特征在于，构建方法如下：

5.根据权利要求4所述的携带egfp标签的cav全长基因感染性克隆质粒，其特征在于，步骤(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：成子强，王卓媛，周德方，严天行，李睿琪，张利，周静，文静，宋雨宸，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：