农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种农产品中15种β‑受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，属于检测技术领域。农产品中15种β‑受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，所述农产品为菠菜、莴笋或桃子；所述15种β‑受体激动剂类抗生素为西马特罗、西布特罗、利托君、克仑赛罗、羟甲基克伦特罗、克仑丙罗、莱克多巴胺、氯丙那林、克伦特罗、妥布特罗、溴布特罗、班布特罗、马布特罗、克仑潘特、马喷特罗；所述3种酰胺醇类抗生素为氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素。本发明专利技术的方法具有简便、高效、准确、灵敏、经济等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，属于检测。

技术介绍

1、抗生素作为抗感染药物已被广泛应用于人类疾病治疗、畜牧业、兽医及农业种植等方面，其中抗生素滥用问题屡见不鲜，而经常食用含残留抗生素的食物，抗生素会逐渐在体内积累而导致身体的器官发生病变，但目前食品中抗生素污染的主要关注点仍是动物源性食品。随着环境中抗生素类新污染物问题的凸显，残留在水、土及动物粪便中的抗生素可被植物吸收富集，蔬菜中抗生素污染问题已较为突出，吴小莲，包艳萍，向垒，等.固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定蔬菜中8种磺胺类抗生素[j].环境化学，2013，32(6):1038-1044.公开在对蔬菜中喹诺酮类抗生素残留量进行检测时，发现在马铃薯等9种蔬菜中均有喹诺酮被检出，其中苦瓜中环丙沙星和恩诺沙星的总含量为190μg/kg，超过了动物源性食品中最高残留限量(100μg/kg)；卢金连，杜明慧，潘运安，等.有机蔬菜中喹诺酮类抗生素污染特征与风险评估[j].环境科学与技术，2021，44(3):9.公开对5个典型有机蔬菜基地生产的39份有机蔬菜中4种喹诺酮类抗生素的含量分析和健康风险评价结果表明，4种喹诺酮类抗生素在39份有机蔬菜样品中检出率为52％～100％，其中诺氟沙星和恩诺沙星高达100％，有50％以上样品中4种喹诺酮类抗生素被同时检出。居民健康饮食中蔬菜日常摄入量为动物源性食品的2倍以上，可见，开展蔬菜中抗生素污染的调查摸底、风险评估、限量标准制定、污染治理等系统工作已成为一项亟待解决的食品安全问题，而如何快速、高效、全面、准确的检测出蔬菜中抗生素的种类和含量则是重要前提和关键所在。然而，目前尚未制定形成蔬菜等植物源食品中抗生素含量检测的标准体系，仅有的db34t 4335-2022《芽菜类蔬菜中喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》和bjs202310《豆芽、豆制品、火锅及麻辣烫底料中喹诺酮类、磺胺类、硝基咪唑类、四环素类化合物的测定》两项相关标准只适用于芽菜、豆制品等样品，还有部分文献报道了豆芽、茭白等叶绿素含量较少的蔬菜中喹诺酮类、磺胺类、四环素类等抗生素的测定方法，而针对菠菜、莴笋、桃子等营养物质丰富、叶绿素含量高的复杂基质蔬菜、水果样品中β-受体激动剂类、酰胺醇类和硝基咪唑类抗生素同时检测的方法尚无报道。

技术实现思路

1、本专利技术的目的是提供一种新的农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法。

2、为达到上述目的，所述农产品为菠菜、莴笋或桃子；

3、所述15种β-受体激动剂类抗生素为西马特罗、西布特罗、利托君、克仑赛罗、羟甲基克伦特罗、克仑丙罗、莱克多巴胺、氯丙那林、克伦特罗、妥布特罗、溴布特罗、班布特罗、马布特罗、克仑潘特、马喷特罗；

4、所述3种酰胺醇类抗生素为氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素；

5、所述11种硝基咪唑类抗生素为4-硝基咪唑、2-甲基-5-硝基咪唑、羟基甲硝唑、羟甲基甲硝咪唑、甲硝唑、洛硝哒唑、地美硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝咪唑、异丙硝唑、羟基异丙硝唑；

6、所述测定方法包括：

7、a.样品前处理：

8、将所述农产品匀浆后加入0.1％氨水乙腈混匀，超声处理30min，冷却至室温，加入nacl混匀，于8000rpm/min下离心5min，取6ml上清液与quechers净化包混合，剧烈振荡1min，于8000rpm/min下离心5min，取上清液5.0ml，于30℃水浴条件下氮吹至近干，用1.0ml复溶溶剂溶解残渣，过0.22μm尼龙滤膜，得到待测溶液，所述复溶溶剂为甲醇﹕乙腈﹕水﹕甲酸按照体积比10﹕10﹕80﹕0.1混合；

9、所述农产品、0.1％氨水乙腈、nacl的质量体积比为：10g:25.0ml:5g；

10、所述quechers净化包为无水硫酸镁500mg、psa 50mg、c1850 mg～100mg、gcb50mg；

11、b.将a步骤所述待测溶液用液相色谱-串联质谱联用仪测定；

12、所述液相色谱的色谱条件为：色谱柱：agilent rrhd sb-c18色谱柱；流动相：0.1％甲酸水-含20％甲醇的0.1％甲酸乙腈；流量：0.2ml/min；柱温：30℃，进样体积：5μl；

13、所述串联质谱的质谱条件为：电喷雾离子源正、负离子模式检测，监测模式为多反应模式；具体仪器参数：干燥气n2温度300℃，干燥气n2流量10l/min，雾化气压力40psi(276kpa)，鞘气n2温度350℃，鞘气n2流量12l/min，毛细管电压3500v。

14、含20％甲醇的0.1％甲酸乙腈为体积百分比，例如取200ml甲醇，1ml甲酸，加乙腈定容至1l。

15、在一种具体实施方式中，所述农产品为菠菜。

16、在一种具体实施方式中，所述方法还包括步骤c.将b步骤检测结果扣除空白实验的检测结果得到最终检测结果；所述空白实验不加农产品，其余同步骤a和b。

17、在一种具体实施方式中，所述agilent rrhd sb-c18色谱柱的规格为100mm×2.1mm，1.8μm。

18、在一种具体实施方式中，所述液相色谱的梯度洗脱条件见表1：

19、表1梯度洗脱程序

20、

21、在一种具体实施方式中，所述15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素质谱的保留时间及mrm参数表2：

22、表215种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素的质谱保留时间和质谱参数

23、

24、在一种具体实施方式中，所述农产品的质量精确至0.01g。

25、在一种具体实施方式中，所述15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素中，甲砜霉素和氟甲砜霉素的检出限为0.25μg/kg，定量限为1.25μg/kg，而其余的β-受体激动剂、酰胺醇类和硝基咪唑类抗生素的检出限均为0.05μg/kg，定量限均为0.25μg/kg。

26、在一种具体实施方式中，所述菠菜、莴笋或桃子中甲砜霉素和氟甲砜霉素的平均加标回收率为90.19％～106.95％，其余目标物的平均加标回收率范围为60.95％～118.55％。

27、在一种具体实施方式中，所述菠菜、莴笋或桃子中甲砜霉素和氟甲砜霉素的相对标准偏差范围为0.1％～5.4％，其余目标物的相对标准偏差范围为0.1％～14.9％。

28、有益效果：

29、本专利技术的方法甲砜霉素和氟甲砜霉素在2.5ng/ml～125ng/ml质量浓度范围内，其余β-受体激动剂、酰胺醇和硝基咪唑类抗生素在0.5ng/ml～25ng/ml质量浓度范围内线性关系均良好，相关系数r均≥0.99；

30、甲砜霉素和氟甲砜霉素的检出限为0.25μg/kg，定量限为本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述农产品为菠菜、莴笋或桃子；

2.根据权利要求1所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述农产品为菠菜。

3.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述方法还包括步骤C.将B步骤检测结果扣除空白实验的检测结果得到最终检测结果；所述空白实验不加农产品，其余同步骤A和B。

4.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述AgilentRRHD SB-C18色谱柱的规格为100mm×2.1mm，1.8μm。

5.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述液相色谱的梯度洗脱条件见表1：

6.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素质谱的保留时间及MRM参数见表2：

7.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述农产品的质量精确至0.01g。

8.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述甲砜霉素和氟甲砜霉素的检出限为0.25μg/kg，定量限为1.25μg/kg，而其余β-受体激动剂、酰胺醇和硝基咪唑类抗生素的检出限均为0.05μg/kg，定量限均为0.25μg/kg。

9.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述菠菜、莴笋或桃子中甲砜霉素和氟甲砜霉素的平均加标回收率为90.19％～106.95％，其余目标物的平均加标回收率范围为60.95％～118.55％。

10.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述菠菜、莴笋或桃子中甲砜霉素和氟甲砜霉素的相对标准偏差范围为0.1％～5.4％，其余目标物的相对标准偏差范围为0.1％～14.9％。

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【技术特征摘要】

1.农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述农产品为菠菜、莴笋或桃子；

2.根据权利要求1所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述农产品为菠菜。

3.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述方法还包括步骤c.将b步骤检测结果扣除空白实验的检测结果得到最终检测结果；所述空白实验不加农产品，其余同步骤a和b。

4.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述agilentrrhd sb-c18色谱柱的规格为100mm×2.1mm，1.8μm。

5.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述液相色谱的梯度洗脱条件见表1：

6.根据权利要求1或2所述农产品中15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝基咪唑类抗生素含量的测定方法，其特征在于，所述15种β-受体激动剂、3种酰胺醇和11种硝...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴微，赵爱平，陈璐，李怀平，冯德建，叶善蓉，钱杉杉，王智，李椤颢，
申请(专利权)人：中国测试技术研究院，
类型：发明
国别省市：