改造的Klenow片段及应用制造技术

本发明专利技术涉及改造的Klenow片段及应用，具体地，涉及一种改造的Klenow片段，该改造的Klenow片段氨基酸序列上的F762、A842、I709和P603中的至少一个位置或者功能等效的位置包含至少一个氨基酸置换突变。本发明专利技术提供的改造的Klenow片段的DNA聚合酶活性较野生型Klenow片段高，并且，将该改造的Klenow片段应用在测序中，能够提高测序能力和测序数据质量如提高读长和/或降低连续重复碱基比例等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域。具体而言，本专利技术涉及一种改造的klenow片段及应用。背景介绍klenow酶，也叫klenow片段或者klenow大片段，是大肠杆菌dna聚合酶i经过枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶处理后得到的两个片段中的分子量较大的那个片段。klenow片段保留了dna聚合酶i的5ˊ-3ˊ聚合酶和3ˊ-5ˊ外切酶活性、缺少5ˊ-3ˊ外切酶活性，常用于补平dna单链末端。另外，试验也常使用的exo-klenow片段，是klenow片段的突变体，为不具有外切酶活性的klenow片段，该酶也常表示为klenow片段(3'→5'exo-)。klenow片段或exo-klenow片段可在37摄氏度进行聚合反应/扩增，因而利用klenow片段或exo-klenow片段进行扩增反应对实验设备等的温控要求相对较低；并且，klenow片段或者exo-klenow片段相对于dna聚合酶i来说，分子量较小，合成相应的核酸序列来构建表达载体相对较容易，便于制备，利于工业应用。klenow片段或exo-klenow片段的扩增效果与该聚合酶本身的特性包括合成能力、保真度/校正能力、特异性/酶活性本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种改造的Klenow片段，其特征在于，所述改造的Klenow片段用于核酸测序，以DNA聚合酶I为基准，所述改造的Klenow片段氨基酸序列存在氨基酸置换突变，且所述氨基酸突变为组合(1)、组合(2)中的一种：

2.根据权利要求1所述的改造的Klenow片段，其特征在于，所述改造的Klenow片段氨基酸序列的至少一个末端带有一段长度小于12aa的已知序列；

3.一种核酸分子，所述核酸分子编码如权利要求1-2任一所述的改造的Klenow片段。

4.一种表达载体，所述表达载体包含权利要求3所述的核酸分子。

5.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含...

【技术特征摘要】

1.一种改造的klenow片段，其特征在于，所述改造的klenow片段用于核酸测序，以dna聚合酶i为基准，所述改造的klenow片段氨基酸序列存在氨基酸置换突变，且所述氨基酸突变为组合(1)、组合(2)中的一种：

2.根据权利要求1所述的改造的klenow片段，其特征在于，所述改造的klenow片段氨基酸序列的至少一个末端带有一段长度小于12aa的已知序列；

3.一种核酸分子，所述核酸分子编码如权利要求1-2任一所述的改造的klenow片段。

4.一种表达载体，所述表达载体包含权利要求3所述的核酸分子。

5.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求4所述的载...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈清斌，陈巍月，李红丹，林霞，王文，骆玮玮，孙雷，
申请(专利权)人：深圳市真迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：