Rc3h1基因干扰的嵌合抗原受体T细胞的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了Rc3h1基因干扰的嵌合抗原受体T细胞的构建方法及应用，涉及CAR‑T细胞治疗技术领域。Rc3h1基因干扰的嵌合抗原受体T细胞的构建方法包括以下步骤：(1)设计RNAi靶序列；(2)根据RNAi靶序列设计干扰序列；(3)构建pLL3.7NKG2D CAR‑Rc3h1shRNA质粒；(4)质粒转染，进行慢病毒包装；(5)构建shRc3h1NKG2D CAR‑T细胞。本发明专利技术采用上述Rc3h1基因干扰的嵌合抗原受体T细胞的构建方法及应用，能够改善现有CAR‑T在实体瘤治疗中增殖和激活受限，耗竭严重，抗肿瘤作用的有效性和持续性欠佳的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及car-t细胞治疗，尤其是涉及rc3h1基因干扰的嵌合抗原受体t细胞的构建方法及应用。

技术介绍

1、嵌合抗原受体t细胞(chimeric antigen receptor t-cell,car-t)疗法是指通过体外基因工程改造赋予t细胞识别特定肿瘤细胞表面抗原的能力，从而实现特异性杀伤的过继性细胞疗法。car的主体结构包括以下几个部分：特异性识别肿瘤抗原的单链抗体可变区(scfv)或t细胞/nk细胞受体结合域、linker、跨膜区，以及共刺激分子和cd3ζ融合胞内段。双信号的设计使car-t细胞能够以mhc非限制性的方式识别和杀伤肿瘤细胞。car-t在恶性血液肿瘤治疗中相对成熟，已有多款fda批准上市的car-t细胞产品；尽管car-t治疗实体瘤的相关研究数量众多，在某些实体瘤中取得了良好的结果，但总体反应率仍不尽如人意。car-t在实体瘤治疗中的主要的困境是，car-t细胞在免疫抑制性肿瘤微环境中难以浸润，增殖和激活受到限制，耗竭严重，不能持续发挥抗肿瘤作用。因此，以增强car-t细胞抗肿瘤活性、延长其在体内的生存时间为目的，进行car-本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.Rc3h1干扰序列，由正义序列和反义序列、连接二者的spacer

2.根据权利要求1所述的Rc3h1干扰序列，其特征在于，所述Rc3h1-shRNA-1的靶序列Rc3h1-siRNA-1如SEQ ID NO.7所示，

3.Rc3h1基因干扰的嵌合抗原受体T细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体方法为：在干扰序列两端各添加20个碱基的同源臂，合成两条全长寡核苷酸序列，两条链经退火互补配对形成双链，通过同源重组法连接到pLL3.7NKG2D CAR质粒的U6启动子后，经EcoRI单...

【技术特征摘要】

1.rc3h1干扰序列，由正义序列和反义序列、连接二者的spacer

2.根据权利要求1所述的rc3h1干扰序列，其特征在于，所述rc3h1-shrna-1的靶序列rc3h1-sirna-1如seq id no.7所示，

3.rc3h1基因干扰的嵌合抗原受体t细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体方法为：在干扰序列两端各添加20个碱基的同源臂，合成两条全长寡核苷酸序列，两条链经退火互补配对形成双链，通过同源重组法连接到pll3.7nkg2d car质粒的u6启动子后，经ecori单酶切鉴定和dna测序，成功构建质粒。

5.根据权利要求3所述的构...

【专利技术属性】
技术研发人员：江文正，葛雨嘉，
申请(专利权)人：恩替苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：