【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学检测，具体涉及一种同时测定黑参不同部位原型及次生皂苷的含量检测方法。
技术介绍
1、人参( panax ginseng c.a. mey.)为五加科植物，具有大补元气，补脾益肺，生津养血，安神益智的功效。由于生长环境和栽培方式的不同，人参在各种环境条件、生长方式和生长周期下，其叶、茎、根部位的性状和化学成分都会存在差异。这些化学成分上的差异可能导致人参不同部位在药理方面展现出不同的功效。
2、根据炮制方法可将人参分为鲜参、生晒参、红参和黑参等，目前市场上主要流通生晒参和红参，因此相关研究也较为全面、透彻，而对于黑参的相关研究较少，其物质基础尚不明确。黑参是通过对鲜参进行多次反复蒸制和烘干而得到人参炮制品，已有研究表明，黑参经过炮制后的稀有人参皂苷含量变高，使得人参在抗肿瘤、降血糖、抗氧化、抗炎等方面表现出更强的活性。
3、原型人参皂苷是人参主要的药理活性成分，也是评价人参品质的主要指标，根据苷元的不同，原型人参皂苷可分为原人参二醇型（ppd）、原人参三醇型（ppt）及齐墩果酸型（oa）。原型人参皂苷是由苷元和糖基相连构成的三萜类皂苷，为自然界天然存在的人参皂苷，主要存在于人参初级炮制品中，经过长时间蒸制和干燥后会使苷元母核或侧链集团结构改变而生成次生人参皂苷，次生人参皂苷因其含量极低且难以从人参中提取，因此被称为稀有皂苷，导致人参与其各种炮制品在生物活性上存在差异。
4、黑参是人参的炮制品，其采用的炮制工艺是传统方法“九蒸九晒
技术实现思路
1、人参( panax ginseng c.a. mey.)为五加科植物，具有大补元气，补脾益肺，生津养血，安神益智的功效。由于生长环境和栽培方式的不同，人参在各种环境条件、生长方式和生长周期下，其叶、茎、根部位的性状和化学成分都会存在差异。这些化学成分上的差异可能导致人参不同部位在药理方面展现出不同的功效。
2、根据炮制方法可将人参分为鲜参、生晒参、红参和黑参等，目前市场上主要流通生晒参和红参，因此相关研究也较为全面、透彻，而对于黑参的相关研究较少，其物质基础尚不明确。黑参是通过对鲜参进行多次反复蒸制和烘干而得到人参炮制品，已有研究表明，黑参经过炮制后的稀有人参皂苷含量变高，使得人参在抗肿瘤、降血糖、抗氧化、抗炎等方面表现出更强的活性。
3、原型人参皂苷是人参主要的药理活性成分，也是评价人参品质的主要指标，根据苷元的不同，原型人参皂苷可分为原人参二醇型（ppd）、原人参三醇型（ppt）及齐墩果酸型（oa）。原型人参皂苷是由苷元和糖基相连构成的三萜类皂苷，为自然界天然存在的人参皂苷，主要存在于人参初级炮制品中，经过长时间蒸制和干燥后会使苷元母核或侧链集团结构改变而生成次生人参皂苷，次生人参皂苷因其含量极低且难以从人参中提取，因此被称为稀有皂苷，导致人参与其各种炮制品在生物活性上存在差异。
4、黑参是人参的炮制品，其采用的炮制工艺是传统方法“九蒸九晒”，然而，目前对于炮制前后中主要活性成分的变化情况有待深入的分析和研究。本专利技术基于uplc-ms/ms技术测定人参炮制前后人参皂苷的含量，并比较人参不同部位（包括其叶、茎、芦头、主根、须根部位）炮制前、后人参皂苷含量并分析其在不同人参样品中的变化情况，为人参及黑参的综合相关研究提供了参考。
5、进一步的，在步骤s2中，所述色谱的条件包括：流动相流速为0.3ml/min，a相为0.1%甲酸水溶液，b相为乙腈，柱温为30℃，进样量为1µl，具体洗脱梯度如下：
6、 时间 a% b% 0 72.0 28.0 1.0 72.0 28.0 11.0 60.0 40.0 13.0 15.0 85.0 15.0 5.0 95.0 17.0 5.0 95.0 17.01 72.0 28.0 23.0 72.0 28.0
7、。
8、进一步的，所述色谱的条件包括：色谱柱为watersacquity uplc acquity beh色谱柱，规格为100mm×2.1mm，粒径为1.7µm。
9、进一步的，在步骤s2中，所述质谱的条件包括：esi离子源；扫描模式为正负离子切换，多反应监测模式检测；雾化气流量3.0l/min；干燥气流量10.0l/min；加热气流量10l/min；接口温度300℃；去溶剂管温度250℃；加热块温度400℃；碰撞诱导解离电压270kpa。
10、本专利技术有益效果在于：
11、本专利技术基于uplc-ms/ms技术开发检测人参及其炮制品中原型皂苷和次生皂苷，并比较人参不同部位（包括其叶、茎、芦头、主根、须根部位）炮制前、后人参皂苷含量。已有研究数据表明，人参的叶、茎、根等部位的性状和化学成分存在差异，不同的炮制品其有效成分也存在差异，本专利技术研究了人参及其炮制品中20个人参皂苷的检测方法，比较人参不同部位（包括其叶、茎、芦头、主根、须根部位）炮制前、后人参皂苷含量，发现经过炮制后，人参皂苷含量在五个部位中发生了显著变化，经过炮制后黑参中人参皂苷含量及种类显著升高，具体表现为炮制后稀有人参皂苷含量本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同时测定黑参不同部位原型及次生皂苷的含量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述原型及次生皂苷包括人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷S-Rg2、人参皂苷Ro、人参皂苷S-Rg3、人参皂苷Rg5、人参皂苷R-Rh1、人参皂苷S-Rh2、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rk3、人参皂苷F2、人参皂苷F3、人参皂苷F4及人参皂苷CK。
3.根据权利要求2所述的含量检测方法，其特征在于，在步骤S1中，所述对照品溶液的制备方法包括：分别称取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷S-Rg2、人参皂苷Ro、人参皂苷S-Rg3、人参皂苷Rg5、人参皂苷R-Rh1、人参皂苷S-Rh2、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rk3、人参皂苷F2、人参皂苷F3、人参皂苷F4、人参皂苷CK对照品，精密称定，加入色谱甲醇配制成人参皂苷检测成分混合对照品溶液，质量浓
4.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，在步骤S1中，所述不同部位的供试品包括人参的叶、茎、芦头、主根及须根部位。
5.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述黑参经人参炮制后制得。
6.根据权利要求5所述的含量检测方法，其特征在于，所述黑参炮制的具体方法为将人参于高压灭菌锅100℃蒸2小时后于60℃干燥18h，重复9次，最后一次干燥至水分≤12%，即得。
7.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，在步骤S1中，所述供试品溶液的具体制备方法包括：将各黑参样品粉碎成细粉后，精确称取0.1g的样品，并加入2mL 70%甲醇溶液进行30分钟的超声提取，超声结束后需补足失去的体积，然后通过0.22µm微孔滤膜过滤，最终取续滤液即得。
8.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，在步骤S2中，所述色谱的条件包括：流动相流速为0.3mL/min，A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙腈，柱温为30℃，进样量为1µL，具体洗脱梯度如下：
9.根据权利要求8所述的含量检测方法，其特征在于，所述色谱的条件包括：色谱柱为WatersACQUITY UPLC ACQUITY BEH色谱柱，规格为100mm×2.1mm，粒径为1.7µm。
10.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，在步骤S2中，所述质谱的条件包括：ESI离子源；扫描模式为正负离子切换，多反应监测模式检测；雾化气流量3.0L/min；干燥气流量10.0L/min；加热气流量10L/min；接口温度300℃；去溶剂管温度250℃；加热块温度400℃；碰撞诱导解离电压270kPa。
...【技术特征摘要】
1.一种同时测定黑参不同部位原型及次生皂苷的含量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述原型及次生皂苷包括人参皂苷rb1、人参皂苷rb2、人参皂苷rb3、人参皂苷rc、人参皂苷rd、人参皂苷re、人参皂苷rf、人参皂苷rg1、人参皂苷s-rg2、人参皂苷ro、人参皂苷s-rg3、人参皂苷rg5、人参皂苷r-rh1、人参皂苷s-rh2、人参皂苷rk1、人参皂苷rk3、人参皂苷f2、人参皂苷f3、人参皂苷f4及人参皂苷ck。
3.根据权利要求2所述的含量检测方法，其特征在于，在步骤s1中，所述对照品溶液的制备方法包括：分别称取人参皂苷rb1、人参皂苷rb2、人参皂苷rb3、人参皂苷rc、人参皂苷rd、人参皂苷re、人参皂苷rf、人参皂苷rg1、人参皂苷s-rg2、人参皂苷ro、人参皂苷s-rg3、人参皂苷rg5、人参皂苷r-rh1、人参皂苷s-rh2、人参皂苷rk1、人参皂苷rk3、人参皂苷f2、人参皂苷f3、人参皂苷f4、人参皂苷ck对照品，精密称定，加入色谱甲醇配制成人参皂苷检测成分混合对照品溶液，质量浓度分别为0.412、0.208、0.207、0.204、0.202、0.212、0.204、0.204、0.400、0.408、0.200、0.414、0.1、0.410、0.410、0.412、0.408、0.400、0.416、0.400mg/ml，将甲醇逐渐稀释后，用于配制不同质量浓度梯度的标准曲线工作溶液。
4.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，在步骤s1中，...
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