一种提高荧光素酶稳定性的方法及突变的高稳定性荧光素酶HS-Lu、基因及其应用技术

本发明专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种提高荧光素酶稳定性的方法及突变的高稳定性荧光素酶HS‑Lu、基因及其应用。野生型荧光素酶Ppy‑Luc稳定性极差，且在重组毕赤酵母工程菌中表达量较低，本发明专利技术将Ppy‑Luc切除了C末端115个氨基酸，并对第296位和第326位氨基酸由Ala突变为Cly。本发明专利技术的高稳定性荧光素酶HS‑Luc稳定性及表达量均有大幅提高，是一种优良的高稳定性荧光素酶，可满足各领域需求。本发明专利技术的高稳定性荧光素酶HS‑Luc通过毕赤酵母X33高效表达后，能够达到较高的发酵水平，可大幅降低生产成本，使其在各领域中显示出更大的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种提高荧光素酶稳定性的方法及突变的高稳定性荧光素酶hs-lu、基因及其应用。

技术介绍

1、荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，来源于荧火虫的荧光素酶最具有代表性。在o2、mg2+、atp存在时，可催化d-荧光素氧化脱羧转化为氧合荧光素并发出绿色到橙黄荧光。

2、其反应原理如下所示：

3、

4、迄今为止研究和应用最为广泛的是美国东海岸的photinus pyralis，即北美萤火虫荧光素酶，其分子量约为62kb，由551个氨基酸残基构成，肽链中含有大量疏水氨基酸。

5、荧光素酶具有反应灵敏、结果准确、操作简便、应用范围广、无毒副作用等优点，非常适合应用于生命科学研究、医学、刑侦、药理学、检测等各个领域。例如，在生命科学研究方面，荧光素酶可用于报告基因检测系统、rna干扰、蛋白质之间的相互作用、活体免疫性能和致病基因等方面的研究。

6、1967年，mcelroy第一次将萤火虫荧光素酶应用于测定atp含量，发现反应的发光强度在特定本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.突变的高稳定性荧光素酶HS-Lu，其特征在于，所述突变的高稳定性荧光素酶HS-Lu的氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。

2.一种荧光素酶基因，其特征在于，所述荧光素酶基因编码权利要求1所述的突变的高稳定性荧光素酶HS-Lu。

3.根据权利要求2所述的荧光素酶基因，其特征在于，所述荧光素酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No:3所示。

4.一种提高荧光素酶稳定性的方法，其特征在于，所述方法包括将氨基酸序列如SEQID No:2所示的蛋白质进行以下操作的步骤：

5.包括权利要求2所述的荧光素酶基因的重组表达载体。</p>

6.包括...

【技术特征摘要】

1.突变的高稳定性荧光素酶hs-lu，其特征在于，所述突变的高稳定性荧光素酶hs-lu的氨基酸序列如seq id no:4所示。

2.一种荧光素酶基因，其特征在于，所述荧光素酶基因编码权利要求1所述的突变的高稳定性荧光素酶hs-lu。

3.根据权利要求2所述的荧光素酶基因，其特征在于，所述荧光素酶基因的核苷酸序列如seq id no:3所示。

4.一种提高荧光素酶稳定性的方法，其特征在于，所述方法包括将氨基酸序列如seqid no:2所示的蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗长财，何梦玲，黄少梅，朱强，
申请(专利权)人：中科绿康生物科技珠海有限公司，
类型：发明
国别省市：