一种杏梅系梅花叶片愈伤组织的遗传转化方法技术

本发明专利技术涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种杏梅系梅花叶片愈伤组织的遗传转化方法。本发明专利技术先制备梅花遗传转化受体，然后以RUBY基因为报告基因转化农杆菌制备侵染菌液，再经过愈伤组织侵染和共培养，最终筛选获得抗性愈伤组织。本发明专利技术提供的方法可通过观察或PCR检测的方式对抗性愈伤组织进行鉴定。本发明专利技术成功侵染梅花愈伤组织并获得有RUBY报告基因表达的红色愈伤组织，诱导率高，为梅花遗传体系的建立及遗传改良提供了良好基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物基因工程，具体涉及一种杏梅系梅花叶片愈伤组织的遗传转化方法。

技术介绍

1、梅花（ prunus mumesieb. et. zucc.）是蔷薇科李属木本植物，作为中国传统名花之一，在我国已有3000多年的引种栽培历史，在我国园林的生态应用中有着重要地位和文化内涵。梅花按其种源组成可分为真梅系、杏梅系和樱李梅系，其中杏梅系梅花是梅花与杏的种间杂交种。梅花应用范围广泛，是重要的早春观花植物，也可作食用、药用等，具有较高的观赏价值和经济价值。

2、为了培育抗性强、观赏价值高的梅花品种应用于园林绿化，需开展梅花品种的选育和改良。但在品种选育过程中，一般都采取常规杂交育种技术，育种周期较长和效率低。植物基因工程的发展为梅花育种提供了新的途径，但目前梅花高效遗传转化体系还处于初步研究阶段，且复杂木本植物难以建立高效的遗传转化体系。目前尚缺少行之有效的杏梅系梅花叶片愈伤组织的遗传转化方法。

3、有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路...

【技术保护点】

1.梅花的遗传转化方法，其特征在于，以杏梅系梅花枝条上当年新发1-2个月的新鲜叶片为外植体，经愈伤组织诱导、侵染培养和筛选，得到转化成功的愈伤组织；其中，所述愈伤组织诱导使用的培养基配方包括：1.0±0.2mg/L的6-BA，1.0±0.2mg/L的TDZ和0.5±0.1mg/L的2,4-D。

2.根据权利要求1所述梅花的遗传转化方法，其特征在于，愈伤组织诱导使用的培养基配方以WPM为基础培养基，还包括30±5g/L的蔗糖，7±1g/L的琼脂，pH值为5.8-6.0。

3.根据权利要求2所述梅花的遗传转化方法，其特征在于，用于侵染的菌液OD600值为0.7±0.1...

【技术特征摘要】

1.梅花的遗传转化方法，其特征在于，以杏梅系梅花枝条上当年新发1-2个月的新鲜叶片为外植体，经愈伤组织诱导、侵染培养和筛选，得到转化成功的愈伤组织；其中，所述愈伤组织诱导使用的培养基配方包括：1.0±0.2mg/l的6-ba，1.0±0.2mg/l的tdz和0.5±0.1mg/l的2,4-d。

2.根据权利要求1所述梅花的遗传转化方法，其特征在于，愈伤组织诱导使用的培养基配方以wpm为基础培养基，还包括30±5g/l的蔗糖，7±1g/l的琼脂，ph值为5.8-6.0。

3.根据权利要求2所述梅花的遗传转化方法，其特征在于，用于侵染的菌液od600值为0.7±0.1。

4.根据权利要求3所述梅花的遗传转化方法，其特征在于，用于侵染的菌液为含有ruby报告基因的农杆菌gv3101重悬液，重悬液成分包括：100±20μmol/l的乙酰丁香酮，ph5.8-6.0。

5.根据权利要求4所述梅花的遗传转化方法，其特征在于，含有ruby报告基因的农杆菌gv3101重悬液的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙丽丹，赵春旭，吴昊，李子葳，苗润田，蒙娟，张启翔，程堂仁，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：