产虾青素的重组巴斯德毕赤酵母菌株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及产虾青素的重组巴斯德毕赤酵母菌株及其构建方法和应用，所述重组巴斯德毕赤酵母菌株通过在宿主菌中表达脱氢酶Zwf1、磷酸脱氢酶Gnd2、NADH激酶Pos5以及β‑胡萝卜素酮醇酶CrtW和β‑胡萝卜素羟化酶CrtZ的融合蛋白CrtZ‑Linker‑CrtW得到；其中，所述宿主菌为巴斯德毕赤酵母基因改造菌株PP‑L。本发明专利技术还基于辅因子工程对重组菌株发酵条件进行优化，进一步提高巴斯德毕赤酵母生产虾青素的能力。本发明专利技术的重组巴斯德毕赤酵母构建方法简单，可以更好的促进虾青素的合成，通过发酵优化，使工程菌株能够利用葡萄糖和甲醇高效合成虾青素，有利于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程和发酵工程，特别是一株高产虾青素的重组巴斯德毕赤酵母菌株及其构建方法和应用。

技术介绍

1、巴斯德毕赤酵母是一种甲基营养酵母，具有很强的呼吸代谢能力，因此在简单培养基中生长到非常高的细胞密度，也可以很容易地从摇瓶扩大到大规模生物反应器。因此，巴斯德酵母的综合特性使该菌株在生产类胡萝卜素等化合物方面具有巨大的潜力。最近的研究已经证明，巴斯德毕赤酵母适合于生产外源蛋白、番茄红素和倍半萜（+）-诺卡酮等天然产物。与其他微生物相比，巴斯德毕赤酵母安全可靠，可用于食品、医药等众多行业；菌株生长速度快，抗逆性强，培养简单，适合工业化；分子操作平台成熟且遗传工具完善，发展前景广阔。雨生红球藻( h. pluvialis)是公认的在自然界中生产天然虾青素的最理想来源，虾青素是一种天然抗氧化剂，是迄今为止发现的抗氧化能力最强的抗氧化剂，其抗氧化能力是天然β-胡萝卜素的10倍，是维生素e的550倍。在巴斯德毕赤酵母中引入外源β-类胡萝卜素合成模块和虾青素合成模块能够使其异源合成虾青素。

2、现本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一株产虾青素的重组巴斯德毕赤酵母菌株，其特征在于，所述重组巴斯德毕赤酵母菌株通过在宿主菌中表达脱氢酶Zwf1、磷酸脱氢酶Gnd2、NADH激酶Pos5以及β-胡萝卜素酮醇酶CrtW和β-胡萝卜素羟化酶CrtZ的融合蛋白CrtZ-Linker-CrtW得到；

2.根据权利要求1所述的重组巴斯德毕赤酵母菌株，其特征在于，所述融合蛋白使用的linker为GGGEKGGG或GGGSGGGS。

3. 根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述脱氢酶Zwf1、磷酸脱氢酶Gnd2、NADH激酶Pos5、β-胡萝卜素酮醇酶CrtW、β-胡萝卜素羟化酶CrtZ的核苷酸序列分别...

【技术特征摘要】

1.一株产虾青素的重组巴斯德毕赤酵母菌株，其特征在于，所述重组巴斯德毕赤酵母菌株通过在宿主菌中表达脱氢酶zwf1、磷酸脱氢酶gnd2、nadh激酶pos5以及β-胡萝卜素酮醇酶crtw和β-胡萝卜素羟化酶crtz的融合蛋白crtz-linker-crtw得到；

2.根据权利要求1所述的重组巴斯德毕赤酵母菌株，其特征在于，所述融合蛋白使用的linker为gggekggg或gggsgggs。

3. 根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述脱氢酶zwf1、磷酸脱氢酶gnd2、nadh激酶pos5、β-胡萝卜素酮醇酶crtw、β-胡萝卜素羟化酶crtz的核苷酸序列分别如seqid no：1-5所示。

4.权利要求1-3任一项所述重组巴斯德毕赤酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括：

5.权利要求1-3任一项所述重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：章文明，王靖楠，姜岷，信丰学，崔心江，郭峰，蒋羽佳，姜万奎，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：