一种用于筛选抗菌肽的底物组合物制造技术

技术编号:43673846 阅读:38 留言:0更新日期:2024-12-18 20:58
本发明专利技术涉及一种用于筛选抗菌肽的底物组合物,其包含表达供体荧光蛋白‑linker‑SpyCatcher融合蛋白的重组宿主菌和受体荧光蛋白‑linker‑SpyTag融合蛋白,该底物组合物实际上提供了一种高效筛选抗菌肽的SpyTag/SpyCatcher系统,是一种用于重组蛋白不可逆结合的技术。本发明专利技术还涉及一种抗菌肽的筛选方法,该筛选方法通过SpyTag/SpyCatcher系统自发特异性识别结合和FRET荧光蛋白间的偶联,显著提高了检测的灵敏度;同时该方法可利用荧光酶标仪和96微孔板实现对抗菌肽的高通量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学,涉及一种用于筛选抗菌肽的底物组合物及其应用。


技术介绍

1、抗菌肽(antimicrobial peptides,amps)是一类具有不同数量(从5个到100多个)氨基酸,且在进化上保守的宿主防御寡肽分子,它具有广泛的靶标,对多种细菌、真菌和病毒都有活性。抗菌肽也被称为阳离子宿主防御肽、阳离子两亲肽和α-螺旋抗菌肽等。抗菌肽通常含较多带有正电荷的残基(如赖氨酸、精氨酸和组氨酸)和许多疏水残基(>50%)。

2、对抗生素过度使用使得抗生素残留和耐药性的问题正威胁着人类的健康和生命。改善抗生素耐药性的问题,一方面可以改变传统抗生素的结构,降低耐药性以提高杀菌活性;另一方面则是发掘新型抗菌制剂来代替传统的抗生素。抗菌肽被认为最有潜力的抗菌药物之一。

3、与抗生素相比,除了它们的结构差异外,抗生素的杀菌是细胞内机制,而抗菌肽通常直接靶向作用于细菌细胞膜。抗菌肽的发现最早可以追溯到1939年,从土壤芽孢杆菌菌株中提取得到一种抗菌剂被证明可以保护小鼠免受肺炎球菌感染,从该抗菌剂中鉴定出一种抗菌肽,被命名为gram本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于筛选抗菌肽的底物组合物,其包含表达供体荧光蛋白-linker-SpyCatcher融合蛋白的重组宿主菌和受体荧光蛋白-linker-SpyTag融合蛋白。

2.根据权利要求1所述的底物组合物,其特征在于,所述供体荧光蛋白包括青色荧光蛋白;所述宿主菌包括大肠杆、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、假单胞菌、酵母菌。

3.根据权利要求1所述的底物组合物,其特征在于,所述受体荧光蛋白包括黄色荧光蛋白;所述受体荧光蛋白-linker-SpyTag融合蛋白通过大肠杆菌表达获得。

4.一种抗菌肽的筛选方法,其包括:

5.根据权利要求4所述的筛选方法,其...

【技术特征摘要】

1.一种用于筛选抗菌肽的底物组合物,其包含表达供体荧光蛋白-linker-spycatcher融合蛋白的重组宿主菌和受体荧光蛋白-linker-spytag融合蛋白。

2.根据权利要求1所述的底物组合物,其特征在于,所述供体荧光蛋白包括青色荧光蛋白;所述宿主菌包括大肠杆、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、假单胞菌、酵母菌。

3.根据权利要求1所述的底物组合物,其特征在于,所述受体荧光蛋白包括黄色荧光蛋白;所述受体荧光蛋白-linker-spytag融合蛋白通过大肠杆菌表达获得。

4.一种抗菌肽的筛选方法,其包括:

5.根据权利要求4所述的筛选方法,其特征在于,所述底物混合液由表达供体荧光蛋白-linker-spycatcher融合蛋白的重组宿主菌悬液和受体荧光蛋白-linker-spytag融合蛋白液混合而成。

6.根据权利要求5所述的筛选方法,其特征在于,所述表达供体荧光蛋白-linker-spycatcher融合蛋白的重组宿主菌悬液的od600=0.2;所述受体荧光蛋白-linker-spytag融合蛋白液的浓度为100μg/ml;

7.根据权利要求5或6所述的筛选方法,其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员:温赛李晋赵晨曦
申请(专利权)人:北京工商大学
类型:发明
国别省市:

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