【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，特别是涉及一种杀菌蛋白质及其编码基因与应用。
技术介绍
1、微生物的细胞壁由多糖组成，主要有：肽聚糖、葡聚糖、甘露聚糖、几丁质和纤维素等组成。真菌基因组中含有丰富的具有糖苷水解酶活力的未知蛋白质，如果可以水解上述多糖宝，就能水解微生物的细胞壁，起到杀菌的效果。已知学术研究领域未报道真菌杀菌蛋白质的相关研究。
2、里氏木霉是重要的工业生产菌株，符合gras(generally regarded as safe)标准，其发酵生产的酶制剂已被广泛应用于食品、饲料等行业。已知学术研究领域未报道里氏木霉菌株可以发酵生产真菌杀菌蛋白质。
3、本专利技术拟利用里氏木霉分泌表达杀菌蛋白质，从而为病原菌杀灭领域开发新的技术思路，提供新的技术方案。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种杀菌蛋白质及其编码基因与应用，以解决上述现有技术存在的问题。本专利技术生产的杀菌蛋白质可以水解细菌的细胞壁，造成藤黄微球菌的溶解。经验证，该杀菌蛋白质可以显著抑制或杀灭革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌和酵母菌，为日化、食品、饲料等行业提供了新的杀菌蛋白质制剂及其制备方法。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供了一种杀菌蛋白质，所述杀菌蛋白质的氨基酸序列为seq id no.1～12任一项所示序列，或seq id no.1～12任一项序列经1～30个氨基酸取代和/或缺失和/或添加后功能相同的序列，或在seq id no.
4、在本领域中，用性能相近或相似的氮基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能；在c末端和/或n末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。因此，在本专利技术中，所述杀菌蛋白质的氨基酸序列还包括具有与杀菌蛋白质相同功能的seq id no.1～12任一项序列的变异形式。这些变异形式包括：若干个(l～30个，优选为1～20个，进一步优选为l～10个，再进一步优选为l～5个)氨基酸的取代和/或缺失和/或添加，以及在seqid no.1～12任一项序列c末端和/或n末端添加一个或数个(1～20个，优选为1～l0个，进一步优选为1～5个)氨基酸。
5、本专利技术还提供了一种编码上述杀菌蛋白质的基因，所述基因的核苷酸序列为seqidno.13～24任一项所示序列，或与seq id no.13～24任一项序列具有85％以上同源性的序列。
6、由于密码子的简并性存在(简并性是指，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列)，因此，在本专利技术中，所述编码杀菌蛋白质的基因的核苷酸序列还包括与seq id no.13～24任一项序列具有85％以上同源性的序列。
7、本专利技术还提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体上包含编码上述杀菌蛋白质的核苷酸序列，或包含上述基因。
8、本专利技术还提供了一种重组微生物，所述重组微生物中包含上述重组表达载体。
9、优选的，所述重组微生物的底盘微生物为木霉菌。
10、优选的，所述木霉菌为里氏木霉qm6a、qm9414、rut-c30、rl-p37、ng14或pc-3-7。
11、本专利技术还提供了一种上述基因、上述重组表达载体或上述重组微生物在生产杀菌蛋白质中的应用。
12、本专利技术还提供了一种杀菌蛋白质的生产方法，将上述重组微生物进行发酵，收集发酵液，得到所述杀菌蛋白质。
13、本专利技术还提供了一种利用上述生产方法制得的杀菌蛋白质在制备杀菌剂中的应用。
14、本专利技术具有如下的有益效果：
15、本专利技术公开了杀菌蛋白质的氨基酸序列，及编码杀菌蛋白质的基因序列。利用木霉表达载体cbh1t1.0，将杀菌蛋白质的编码基因转化到木霉基因组中，成功构建了分泌表达杀菌蛋白质的重组木霉菌株。该重组木霉菌株可用于杀菌蛋白质的生产。通过实验验证，本专利技术生产的杀菌蛋白质可以显著杀灭革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌和酵母菌，其效果优于现有技术中常见的杀菌蛋白质。本专利技术为日化、食品、饲料等行业提供了新的杀菌蛋白质制剂及其制备方法，及其在病原菌杀灭方面的应用。
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1.一种杀菌蛋白质，其特征在于，所述杀菌蛋白质的氨基酸序列为SEQ ID NO.1～12任一项所示序列，或SEQ ID NO.1～12任一项序列经1～30个氨基酸取代和/或缺失和/或添加后功能相同的序列，或在SEQ ID NO.1～12任一项序列C末端和/或N末端添加1～20个氨基酸后功能相同的序列。
2.一种编码权利要求1所述杀菌蛋白质的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.13～24任一项所示序列，或与SEQ ID NO.13～24任一项序列具有85％以上同源性的序列。
3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体上包含编码权利要求1所述杀菌蛋白质的核苷酸序列，或包含权利要求2所述的基因。
4.一种重组微生物，其特征在于，所述重组微生物中包含权利要求3所述的重组表达载体。
5.根据权利要求4所述的重组微生物，其特征在于，所述重组微生物的底盘微生物为木霉菌。
6.根据权利要求5所述的重组微生物，其特征在于，所述木霉菌为里氏木霉QM6a、QM9414、RUT-C30、RL-P37、NG14或P
7.一种权利要求2所述基因、权利要求3所述重组表达载体或权利要求4～6任一项所述重组微生物在生产杀菌蛋白质中的应用。
8.一种杀菌蛋白质的生产方法，其特征在于，将权利要求4～6任一项所述的重组微生物发酵培养，收集发酵液，得到所述杀菌蛋白质。
9.一种利用权利要求8所述生产方法制得的杀菌蛋白质在制备杀菌剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种杀菌蛋白质，其特征在于，所述杀菌蛋白质的氨基酸序列为seq id no.1～12任一项所示序列，或seq id no.1～12任一项序列经1～30个氨基酸取代和/或缺失和/或添加后功能相同的序列，或在seq id no.1～12任一项序列c末端和/或n末端添加1～20个氨基酸后功能相同的序列。
2.一种编码权利要求1所述杀菌蛋白质的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列为seq id no.13～24任一项所示序列，或与seq id no.13～24任一项序列具有85％以上同源性的序列。
3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体上包含编码权利要求1所述杀菌蛋白质的核苷酸序列，或包含权利要求2所述的基因。
4.一种重组微...
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