【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种基于切刻内切酶的一锅式多靶标正交检测系统及其应用。
技术介绍
1、切刻内切酶(nicking enzyme)是一类可特异性识别dna双链序列并仅切刻dna双链中的其中一条链的特定位点的一种位点特异性内切酶。基于其特性，切刻内切酶在构建重组dna、合成生物学等生物工程领域研究中是一种不可或缺的工具。例如，切刻内切酶可用于制备dna修复研究中的预切口dna底物。同时，切刻内切酶还可通过其对dna的特异性切刻作用，应用于等温指数扩增反应中。在切刻内切酶切刻形成的切口处，通过dna聚合酶的作用，以dntps为原料从切口处的3’端聚合延伸，置换出等位的dna链，由此又形成了新的完整的含有切刻内切酶固定区域的dna序列。这条双链再次被核酸切刻内切酶识别切刻，进而开始“聚合——切刻”的循环，产生大量被置换下来的dna单链，从而实现等温扩增。
2、虽然切刻内切酶在分子生物学与分析化学领域已得到广泛应用，但还未有切刻内切酶具有正交反应性能的报道，更没有将其正交反应性能应用于一锅式靶标多重检测的技术报道
【技术保护点】
1.一种基于切刻内切酶的一锅式多靶标正交检测系统，其特征在于，包括针对多个靶标设计的切刻内切酶的识别序列、能够与所述识别序列完全互补配对的荧光报告序列，以及能够识别所述识别序列与荧光报告序列形成的双链并发挥切刻作用的切刻内切酶和反应缓冲溶液；其中，所述识别序列为单链DNA片段，所述单链DNA片段包括所述切刻内切酶发挥切刻作用所需的固定区域和可变区域。
2.如权利要求1所述的基于切刻内切酶的一锅式多靶标正交检测系统，其特征在于，所述荧光报告序列的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有相应的荧光淬灭基团。
3.如权利要求1所述的基于切刻内切酶的一锅...
【技术特征摘要】
1.一种基于切刻内切酶的一锅式多靶标正交检测系统，其特征在于，包括针对多个靶标设计的切刻内切酶的识别序列、能够与所述识别序列完全互补配对的荧光报告序列，以及能够识别所述识别序列与荧光报告序列形成的双链并发挥切刻作用的切刻内切酶和反应缓冲溶液；其中，所述识别序列为单链dna片段，所述单链dna片段包括所述切刻内切酶发挥切刻作用所需的固定区域和可变区域。
2.如权利要求1所述的基于切刻内切酶的一锅式多靶标正交检测系统，其特征在于，所述荧光报告序列的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有相应的荧光淬灭基团。
3.如权利要求1所述的基于切刻内切酶的一锅式多靶标正交检测系统，其特征在于，所述靶标包括双链dna、单链dna、rna或者蛋白质。
4.如权利要求1所述的基于切刻内切酶的一锅式多靶标正交检测系统，其特征在于，所述切刻内切酶包括nt.b...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛东升，朱小立，勾泓荃，李文星，胡嵩，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：
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