一种用于养禽场H7N9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种用于养禽场H7N9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白及其制备方法和应用，本发明专利技术将DIVA检测多肽与大肠杆菌硫氧还蛋白（TrxA）进行融合，在原核表达系统中表达重组融合蛋白。此外，利用纯化得到的多肽融合蛋白作为抗原建立了ELISA方法。该方法仅能够与H7N9亚型禽流感病毒感染鸡血清反应。在大肠杆菌中表达、纯化重组蛋白的费用显著低于化学合成多肽，适于在养禽场开展常态化的疫病监测。本发明专利技术提供的重组融合蛋白及其检测方法为养禽场开展常态化的H7N9亚型AIV检测提供了廉价、高效的诊断抗原与技术。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种用于养禽场h7n9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白及其制备方法和应用。

技术介绍

1、h7n9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,aiv)是一种人畜共患病，对于地方流行性疫病，常态化监测对于掌握疫病流行态势、变化情况与趋势显得尤为重要。目前，基层疫控单位、科研单位或养禽场主要使用三种方法对临床上的禽流感病毒进行监测。一是病毒分离的方法。这种方法是疫病诊断的金标准，但是最大的缺陷在于处理h7n9亚型aiv需要生物安全三级的实验条件，基层检测单位与养禽场不能操作。二是分子生物学方法，如荧光定量pcr等，进行病毒核酸的检测。这种方法的敏感性与操作性较高，但是同样需要较高的生物安全条件进行病毒样品的处理，并且需要昂贵的仪器与专业人员。三是血清学方法。这种方法不需进行活病毒的分离与操作，可操作性、特异性均较强，并且能够与养禽场日常的抗体监测项目整合，无需额外进行采样与检测，能够实现疫病的常态化监测。但是，常规的血清学方法，如血凝抑制试验和琼脂扩散试验等，均不能诊断病毒感染动物。因此，需要开发能够特异性识别h7本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. 一种用于养禽场H7N9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ No. 1所示，所述重组蛋白包含H7N9 HA蛋白多肽、大肠杆菌TrxA蛋白与His标签，所述H7N9 HA蛋白多肽的氨基酸序列如SEQ No. 2所示；所述大肠杆菌TrxA蛋白的氨基酸序列如SEQ No. 3所示。

2. 根据权利要求1所述的用于养禽场H7N9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白的制备方法，其特征在于，编码权利要求1所述重组蛋白的基因序列如SEQ No. 4所示。

3. 根据权利要求1所述的用于养禽场H7N9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白的制备方法...

【技术特征摘要】

1. 一种用于养禽场h7n9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如seq no. 1所示，所述重组蛋白包含h7n9 ha蛋白多肽、大肠杆菌trxa蛋白与his标签，所述h7n9 ha蛋白多肽的氨基酸序列如seq no. 2所示；所述大肠杆菌trxa蛋白的氨基酸序列如seq no. 3所示。

2. 根据权利要求1所述的用于养禽场h7n9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白的制备方法，其特征在于，编码权利要求1所述重组蛋白的基因序列如seq no. 4所示。

3. 根据权利要求1所述的用于养禽场h7n9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白的制备方法，其特征在于，将编码所述h7n9 ha蛋白多肽的基因通过酶切位点ecori与xhoi克隆至原核表达载体pet32a。

4. 根据权利要求3所述的用于养禽场h7n9亚型禽流感病毒常态化监测的重组蛋白的制备方法，其特征在于，在所述h7n9 ha蛋白多肽对应的正向序列的5’端添加ecori位点，互补序列的5’端添加xhoi位点；所述正向序列如seq no. 5所示，互补序列如seq no. 6所示。

5. 根据权利要求3所述的用...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡增垒，刘心怡，冯嘉宁，胡娇，刘秀梵，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：