通过蛋白激酶Fyn的信号转导途径的调节剂在治疗肿瘤疾病中的用途制造技术

本发明专利技术描述了通过蛋白激酶Ｆｙｎ的信号转导途径的调节剂（例如Ｒｈｏ－激酶抑制剂和蛋白激酶ＣＳＫ抑制剂）的用途。本发明专利技术描述了所述调节剂在肿瘤疾病治疗，尤其是神经母细胞瘤的治疗中的用途。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术描述了通过蛋白激酶Fyn的信号转导途径的调节剂(例如Rho-激酶抑制剂)在治疗肿瘤疾病中，尤其是在治疗神经母细胞瘤中的用途。神经母细胞瘤是周围交感神经系统的恶性癌症，其出现在儿童期，是儿童期最常见的恶性癌症之一。每年，在德国约有150-200名儿童受到该肿瘤的折磨，这种肿瘤在进展期通常是不可治愈的。该疾病的病程在不同个体病例中不同，包括从自发消退到渐进性过程并形成转移。肿瘤从自主神经系统的前体细胞发展而来，自主神经系统控制非随意性功能例如心血管系统和肠以及膀胱功能。总而言之，约40％的患病儿童在前五年内死亡。用作预后较差的基础的一个遗传学标准是MYCN基因的扩增，这导致肿瘤中的N-Myc蛋白表达失调。N-myc是转录因子，其可正向或负向调控基因表达。细胞培养模型显示，Myc蛋白调节细胞生长和细胞增殖。目前的临床研究利用三个标准来建立神经母细胞瘤的诊断肿瘤的分期(stage)，患者年龄，以及MYCN基因的扩增。然而，MYCN基因的扩增不是一个可靠的标准，这是因为不显示扩增的MYCN基因的肿瘤也可出现。在这种背景下，本专利技术的问题是利用控制神经母细胞瘤增殖和分化的信号转导途径中的遗传学差异，来确定肿瘤疾病，尤其是神经母细胞瘤的预后和治疗。本专利技术的问题是提供治疗肿瘤疾病，尤其是神经母细胞瘤的新方法。通过微阵列分析的方法，可平行测定来自许多患者的任意数量的样品中大量基因的表达，所述患者均患神经母细胞瘤。随后进行统计学分析，其中临床参数与表达数据相关，并且随后鉴定参与肿瘤进展的致病性基因。通过鉴定参与肿瘤进展的致病性基因，我们可能对所述疾病进行病因治疗。鉴定基因的表达与肿瘤的具体分期有关。令人惊奇的是，大部分这些基因都属于通过蛋白激酶Fyn进行的信号转导途径。该信号转导途径已知调节细胞粘附，细胞增殖，以及细胞培养物的分化。细胞粘附的改变与转移形成有关；细胞分化和增殖控制肿瘤生长本身。可通过独立测定方法证实数据。通过Western印迹法，显示Fyn-激酶的活性和/或表达与肿瘤的分期有关。所有测定显示，通过Fyn的信号转导途径在肿瘤进展期被关闭。表达分析说明了Fyn信号转导途径在转移形成中的作用。此外，我们证实了Fyn对神经母细胞瘤中所述的过程中具有致病性作用。利用两种不同的神经母细胞瘤细胞系，Fyn的表达即信号转导的再活化，导致培养物生长停滞，粘附增加，以及神经母细胞瘤细胞分化。我们随后证实，丢失通过Fyn的信号转导导致所述的生物过程。通过对人神经母细胞瘤的肿瘤样品进行微阵列分析，令人惊奇的发现，通过蛋白激酶Fyn的信号转导途径调节肿瘤生长和转移形成。此外，还发现通过Fyn的信号转导在肿瘤进展期被关闭。影响通过Fyn激酶的信号转导途径，尤其是通过Fyn激酶的信号转导途径的(再)活化(其在神经母细胞瘤中下调)，构成了神经母细胞瘤治疗的一种可能疗法。利用通过蛋白激酶Fyn的信号转导途径的调节剂，根据本专利技术可能防止肿瘤生长和转移形成，并由此治疗肿瘤疾病(尤其是神经母细胞瘤)。本专利技术的另一实施方案涉及通过蛋白激酶Fyn的信号转导途径的调节剂，所述调节剂是酶的抑制剂，这些酶可被活性Fyn直接或间接抑制。本专利技术的另一实施方案涉及导致肿瘤细胞中Fyn活性升高的调节剂。本专利技术另一实施方案涉及调节剂，所述调节剂是蛋白激酶CSK的抑制剂，Rho-激酶的抑制剂，MAP-磷酸酶的抑制剂或蛋白激酶C的激活剂。本专利技术另一实施方案涉及抑制Fyn激酶在体内的蛋白降解的调节剂。本专利技术的另一实施方案涉及调节剂，所述调节剂是拮抗Fyn的磷酸酶的抑制剂。本专利技术的另一实施方案涉及有利于增强通过Fyn的信号转导的调节剂。此外，本专利技术涉及通过蛋白激酶Fyn的信号转导途径的调节剂在制备用于在早期抑制肿瘤转移形成的药物中的用途，所述肿瘤可能是儿科或成人肿瘤。本专利技术还涉及上述调节剂作为药物组合物的组分的用途，其特征在于所述组合物除了包含所述调节剂作为活性成分以外，其还任选地包含载体物质和/或佐剂。本专利技术另一实施方案涉及上述调节剂，其特征在于所述调节剂以可药用的盐，溶剂合物，水化物或可药用的制剂的形式存在。本专利技术另一实施方案涉及上述调节剂，其特征在于所述调节剂以前体药物的形式存在，所述前体药物包含所述调节剂和至少一种可药用的保护基团，所述基团在生理条件下被去除。本专利技术另一实施方案涉及上述调节剂，其特征在于所述调节剂可经口服，经胃肠外，经直肠，通过吸入，经皮或经鼻内给药。 具体实施例方式对本主题的相应科学研究已经在以下文献中公开B.Berwanger，O.Hartmann，E.Bergmann，S.Bernard，D.Nielsen，M.Krause，A.Kartal，D.Flynn，R.Wiedemeyer，M.Schwab，H.Schfer，H.Christiansen and M.Eilers″Loss of a FYN-regulated differentiation and growth arrest pathway inadvanced stage neuroblastoma″in Cancer Cell，Vol.2，November 2002，page377-386，所述文件全部内容包含于此作为参考。为获得对发生神经母细胞瘤的分子序列的深刻认识，利用人Unigene 4608 cDNA芯片，制备94个个体的肿瘤组织样品的表达图谱。每个芯片与cDNA杂交作为对照，所述cDNA来自人神经母细胞瘤细胞系(SHEP)。所述肿瘤的选择使得它们反映肿瘤分期的分布和肿瘤库的整体MYCN扩增。为比较各点和阵列，根据背景校正各个信号，并且计算和标准化log2-转化的开/关调节强度比例。采用具有调整的p值的双样本t统计以鉴定差异表达的基因(Callow等，2000)。调整的p值校正4608个基因的检测并同时估计检测错误基因的总体可能性(见方法)。比较MYCN-扩增的(n＝7)和非扩增的(n＝77)肿瘤时(调整后的p值＜0.05)，我们发现123种差异表达的基因。将这些基因用于非控制的、分阶层分群(non-controlled，hierarchical cluster)中，分析显示除了三种以外的所有肿瘤都被正确分为两种类型之一。功能阐释显示大多数在MYCN-扩增的肿瘤中打开的基因编码这样的蛋白，所述蛋白在蛋白合成，代谢和细胞周期调节中起作用；这与通过利用细胞培养中的可诱导系统产生的微阵列数据一致。这些结果显示Myc蛋白调节细胞生长和细胞增殖，并且利用细胞培养产生的模型延伸至神经母细胞瘤的形成。细胞培养实验中，鉴定为(c-)Myc靶基因的一系列基因的表达在两种类型的肿瘤中有显著差异。在MYCN-扩增的肿瘤中关闭的一大组基因编码参与多阶段信号转导途径的蛋白。这表明Myc蛋白构成信号转导途径的负反馈信号。令人吃惊地，在MYCN扩增的肿瘤中出现增多的细胞周期基因编码这样的蛋白，所述蛋白已知在所述周期中作为关卡反应(checkpoint response)或者在G2或M期中起作用，所述蛋白的作用针对关卡控制和细胞周期晚期中的Myc的新功能。那些基因的失调可简单地反映大多数MYCN-扩增的肿瘤的肿瘤进展期(表1)。为排除所述可能，我们比较了所述基因在4期MYCN-本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过蛋白激酶Ｆｙｎ的信号转导途径的调节剂在预防和／或治疗肿瘤疾病中的用途。

【技术特征摘要】
DE 2002-7-24 10233737.31.通过蛋白激酶Fyn的信号转导途径的调节剂在预防和/或治疗肿瘤疾病中的用途。2.权利要求1的调节剂的用途，用于治疗神经母细胞瘤。3.权利要求1或2的用途，其中所述调节剂是酶的抑制剂，所述酶被活性Fyn直接或间接抑制。4.权利要求1或2的调节剂的用途，其导致肿瘤细胞中的Fyn活性升高。5.权利要求1或2的调节剂的用途，其中所述调节剂是蛋白激酶CSK的抑制剂。6.权利要求1-4中任一项的调节剂的用途，其中所述调节剂是Rho-激酶的抑制剂。7.权利要求1-4中任一项的调节剂的用途，其中所述调节剂是MAP-磷酸酶的抑制剂。8.权利要求1-4中任一项的调节剂的用途，其中所述调节剂是蛋白激酶C的激活剂。9.权利要求1或2的调节剂的用途，其抑制Fyn-激酶在体内的蛋白降解。10.权利要求1或2的调节剂的用...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丁艾勒斯，贝恩德贝尔万格，霍尔格克里斯蒂安森，奥利弗哈特曼，赫尔穆特舍费尔，
申请(专利权)人：莫弗凯姆联合化学股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]