含有ＣｐＧ或寡／多核苷酸以及毒素或肠毒素的双功能组合物制造技术

描述了一种双功能组合物，它包含细胞内有效的免疫调节核酸成分，所述核酸成分含有至少一种免疫刺激，免疫抑制或免疫调节基序，并且是选自具有天然磷酸二酯骨架或被修饰骨架的单核苷酸，二核苷酸，寡核苷酸或多核苷酸，所述核酸成分任选地与特定的抗原组合，与在哺乳动物细胞表面结合于特异性受体的蛋白质结合，所述蛋白质可选自霍乱毒素（ＣＴ），ＣＴ亚单位Ｂ（ＣＴＢ），大肠杆菌热不稳定性肠毒素（ＬＴ），ＬＴ亚单位Ｂ（ＬＴＢ），以及可以与ＣＴ或ＬＴ的抗血清反应的，结合于ＧＭ１神经节苷酯的，ＡＤＰ－核糖基化受体蛋白的，或者引起靶细胞内环ＡＭＰ积累的蛋白质或蛋白质衍生物，以及在与特异性细胞表面成分结合之后可被内在化进入细胞的抗体其它蛋白质。这种组合物可用于治疗肿瘤、感染、移植排斥，免疫抑制状态，自身免疫性疾病和过敏症，并且伴有特定抗原时可进一步用于免疫预防，免疫治疗或耐受性诱导，以及用于在体外处理抗原提呈细胞，随后输注进入哺乳动物体内，达到疫苗接种或免疫治疗的目的。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及一种调节免疫系统的双功能组合物及其用途。更确切地说，本专利技术是关于一种双功能组合物，它包含免疫调节核酸成分，任选地与特定的抗原组合，与特异性细胞表面结合蛋白质成分相结合。这种组合物可用于治疗肿瘤、感染，移植排斥，免疫抑制状态，自身免疫性疾病和过敏症，以及用于免疫预防，免疫治疗或耐受性诱导，还可用于离体处理抗原提呈细胞，随后输注进入哺乳动物体内，达到疫苗接种或免疫治疗的目的。背景已知细菌DNA中未甲基化的CpG或合成的寡脱氧核苷酸(ODN)，可作为强有力的免疫系统激活剂和多种Th1-相关免疫调节细胞因子的诱导剂，这提示有可能用于增强对感染性病原体的固有免疫性(Krieg.2001)。最近又描述了另外几种核酸序列，具有免疫抑制而不是激活特性，可能被用于抑制例如在不同免疫病理状态下的有害免疫反应，包括自身免疫疾病，过敏症和移植排斥。对于含有免疫增强CpG基序的核酸序列已提供了充分的证据，并且现在相信对于免疫抑制序列也将是这种情况，这些序列将调节固有免疫应答以及对特定抗原适应性免疫应答的强度和特征。可以被特定核酸序列增强，抑制或调节的这类适应性免疫应答，可能包括许多不同种类的抗原。这类抗原的例子包括但不局限于病原体来源的抗原，哺乳动物组织来源的抗原，过敏原和宿主来源的抗原，将它们与免疫调节核酸序列一起施用，或者在给予这种序列时它们已经存在于宿主体内，例如对于在感染正进行中病原体来源的抗原以及在自身免疫疾病正进行中或者在移植非同源器官、组织或细胞之后哺乳动物组织来源的抗原是这种情况。已有描述表明，在某些情况下，根据推测通过增加(产生抗原的)相同细胞摄入特定抗原和免疫刺激性核酸序列的机会，使免疫增强的核酸序列偶联于特定的抗原，是刺激针对所述抗原特异适应性免疫应答的特别有效的途径(Shirota等2001，Shirota等2000)。免疫调节的一个特别重要的方面，涉及到在粘膜表面而非胃肠外注射途径施用的特定抗原和免疫调节剂，这种粘膜施用途径包括口腔或胃肠道施用，鼻内施用，直肠内施用以及在生殖器粘膜施用。已经知道，给予抗原，带有或不带有补充的特定免疫调节剂，都可以在粘膜表面(偶尔也在全身)诱发免疫应答，或者确切地说，通过诱导外周耐受性(当通过口腔粘膜途径施用诱导时，常被称为“口腔耐受性”)可抑制对所选择抗原的全身性免疫应答。最近也有许多研究者致力于开发这种类型粘膜诱导的免疫抑制/免疫调节作用，用于对各种自身免疫、过敏或免疫病理状态达到免疫治疗目的。引入所述的这种外周耐受性的特别有效方式是，与霍乱毒素的非毒性结合亚单位(CTB)一起给予特定的致耐受性抗原(Holmgren等2003)。为了刺激，抑制或调节固有免疫性和适应性免疫应答，免疫学作用剂的另一种恰当的应用方式是通过施加在皮肤上或皮肤内。皮下注射和皮内注射给予疫苗和其它抗原是长时间确立的方法，而最近也有描述表明，局部直接施加在皮肤上(所谓的透皮免疫法)也可被用于刺激免疫应答，或者抑制特定的应答或使之发生免疫偏离。据我们所知，现有技术尚没有公开基于双功能免疫调节组合物的产品或其用途，这种双功能组合物包含细胞内有效的免疫调节核酸成分，任选地与特定的抗原组合，与特异性细胞表面结合蛋白质成分相结合，其中后一种成分用于特定地增加另外的细胞内有效的免疫调节核酸成分和任选地特定抗原的摄取和/或反应性。因此，据我们所知，现有技术也没有公开通过对哺乳动物局部给予一种无抗原药物制剂来预防或治疗上皮肿瘤或非呼吸道上皮感染的方法，此药物制剂包含至少一种含有未甲基化5’-胞嘧啶，鸟嘌呤-3’-二核苷酸的免疫刺激性寡或多核苷酸(LSS)，可选自单链和双链DNA，单链和双链RNA以及被修饰的多核苷酸，并与一种特异性细胞表面结合蛋白质成分相结合，用于在哺乳动物治疗上皮肿瘤或非呼吸道上皮感染。
技术实现思路
一方面本专利技术提供了一种优选地协同作用的双功能免疫调节组合物(BIC)，它包含细胞内有效的免疫刺激、免疫抑制或免疫调节核酸序列(以下称为免疫调节序列，IS)，任选地与特定的抗原组合，并与特异性细胞表面结合蛋白质成分相结合，用于增加IS成分和所述任选特定抗原的摄取和/或反应性。因此，本专利技术涉及双功能组合物，它包含细胞内有效的免疫调节核酸成分，所述核酸成分含有至少一种免疫刺激，免疫抑制或免疫调节基序，并是选自具有天然磷酸二酯骨架或被修饰骨架的单核苷酸，二核苷酸，寡核苷酸或多核苷酸，所述核酸成分任选地与特定的抗原组合，与在哺乳动物细胞表面结合于特异性受体的蛋白质结合，所述蛋白质选自霍乱毒素(CT)，CT的亚单位B(CTB)，大肠杆菌热不稳定性肠毒素(LT)，LT的亚单位B(LTB)，以及与CT或LT的抗血清反应的，结合于GM1神经节苷酯的，ADP-核糖基化变体蛋白的，或者引起靶细胞内环AMP积累的蛋白质或蛋白质衍生物，以及在与特异性细胞表面成分结合之后可被内在化进入细胞的抗体或其它蛋白质。在本专利技术双功能组合物的一个实施方案中，其免疫调节核酸成分选自含有未甲基化的5’-胞嘧啶，鸟嘌呤-3’-二核苷酸的免疫刺激性寡或多核苷酸(ISS)，所述寡或多核苷酸选自单链和双链DNA，单链和双链RNA，以及被修饰的多核苷酸。在另一实施方案中，所述ISS选自具有至少6个碱基或碱基对的核苷酸序列，并任选地含有硫代磷酸酯骨架。在目前优选的实施方案中，所述ISS来源于微生物基因组，例如单纯疱疹病毒基因组。在目前更优选的实施方案中，所述ISS是5’-嘌呤嘌呤(嘧啶)CG嘧啶嘧啶-3’(5’-pupu(py)CGPyPy-3’)，例如5’-GACGTT-3’或5’-GTCGTT-3’。在还有另一实施方案中，任选存在的特定抗原实际上是存在的，是选自天然或合成的病原体来源的抗原，哺乳动物组织来源的抗原，过敏原和宿主来源的抗原。本专利技术另一方面涉及双功能组合物，其用于药物制剂。本专利技术的再一方面，涉及本专利技术的双功能组合物在制备用于预防或治疗肿瘤，感染，移植排斥，免疫抑制状态，自身免疫疾病和过敏症的药物制剂中的用途。在本专利技术这方面的实施方案中，该药物制剂是无抗原的，并且是用于哺乳动物上皮肿瘤或非呼吸道上皮感染的局部治疗。在本专利技术这方面的另一实施方案中，本专利技术包含特定抗原的组合物被用于制成免疫预防，免疫治疗或耐受性诱导的药物制剂。这种组合物还被用于离体处理抗原提呈细胞，随后制成药物制剂，用于输注进入哺乳动物体内，达到疫苗接种或免疫治疗的目的。本专利技术更进一步涉及预防或治疗感染、肿瘤、自身免疫疾病、过敏症、移植排斥和其它免疫病理或免疫抑制状态的方法，包括对哺乳动物给予有效剂量的上述双功能免疫调节组合物(以下称为“双功能免疫调节复合物”，BIC)，可通过粘膜，皮肤，深部胃肠外羊膜内施用途径，无论是单独或与特定抗原组合施用，或者通过给予细胞，已离体用BIC处理过这种细胞，然后输注进入哺乳动物体内。因此，本专利技术包括在哺乳动物预防或治疗肿瘤、感染、移植排斥，免疫抑制状态，自身免疫疾病或过敏症的方法，该方法包括对所述哺乳动物给予预防或治疗有效剂量的本专利技术药物制剂的步骤。在本专利技术这方面的实施方案中，该药物制剂是无抗原的并且治疗是针对哺乳动物的上皮肿瘤或非呼吸道上皮感染，并且施用方法是对哺乳动物上皮肿瘤或非呼吸道上皮感染的部位局部施用。本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双功能组合物，其包含细胞内有效的免疫调节核酸成分，所述核酸成分含有至少一种免疫刺激、免疫抑制或免疫调节基序，并且是选自具有天然磷酸二酯骨架或被修饰骨架的单核苷酸、二核苷酸、寡核苷酸或多核苷酸，所述核酸成分任选地与特定的抗原组合，与在哺乳动物细胞表面结合于特异性受体的蛋白质结合，所述蛋白质选自霍乱毒素（ＣＴ）、ＣＴ的亚单位Ｂ（ＣＴＢ）、大肠杆菌热不稳定性肠毒素（ＬＴ）、ＬＴ的亚单位Ｂ（ＬＴＢ）以及与ＣＴ或ＬＴ的抗血清反应的，结合于ＧＭ１神经节苷酯的，ＡＤＰ－核糖基化受体蛋白的，或者引起靶细胞内环ＡＭＰ积累的蛋白质或蛋白质衍生物，以及在与特异性细胞表面成分结合之后可被内在化进入细胞的抗体或其它蛋白质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】SE 2002-6-5 0201701-0;US 2002-6-5 60/385,5881.一种双功能组合物，其包含细胞内有效的免疫调节核酸成分，所述核酸成分含有至少一种免疫刺激、免疫抑制或免疫调节基序，并且是选自具有天然磷酸二酯骨架或被修饰骨架的单核苷酸、二核苷酸、寡核苷酸或多核苷酸，所述核酸成分任选地与特定的抗原组合，与在哺乳动物细胞表面结合于特异性受体的蛋白质结合，所述蛋白质选自霍乱毒素(CT)、CT的亚单位B(CTB)、大肠杆菌热不稳定性肠毒素(LT)、LT的亚单位B(LTB)以及与CT或LT的抗血清反应的，结合于GM1神经节苷酯的，ADP-核糖基化受体蛋白的，或者引起靶细胞内环AMP积累的蛋白质或蛋白质衍生物，以及在与特异性细胞表面成分结合之后可被内在化进入细胞的抗体或其它蛋白质。2.根据权利要求1的组合物，其中的免疫调节核酸成分选自含有未甲基化的5’-胞嘧啶，鸟嘌呤-3’二核苷酸的免疫刺激性寡或多核苷酸(ISS)，所述寡或多核苷酸选自单链和双链DNA、单链和双链RNA以及被修饰的多核苷酸。3.根据权利要求2的组合物，其中的ISS选自具有至少6个碱基或碱基对的核苷酸序列，并任选地包含硫代磷酸酯骨架。4.根据权利要求2或3的组合物，其中的ISS来源于微生物基因组。5.根据权利要求4的组合物，其中的微生物基因组是单纯疱疹病毒基因组。6.根据权利要求2-5中任何之一的组合物，其中的ISS是5’-嘌呤嘌呤(嘧啶)CG嘧啶嘧啶-3’(5’-PuPu(Py)CGPy...

【专利技术属性】
技术研发人员：J霍姆格伦，AM哈兰迪，
申请(专利权)人：多托尔公司，
类型：发明
国别省市：SE[]