一种用于在体外的哺乳动物细胞内定位的胞质、核质定位多肽制造技术

本发明专利技术涉及一种用于在体外的哺乳动物细胞内定位的胞质、核质定位多肽。RfA1蛋白的氨基酸序列由保守的基序以及基序之间非保守的连接片段组成，是一种天然嵌段共聚物，通过对其嵌段排列的氨基酸序列进行重新设计，对基序和连接片段进行重新组合，本发明专利技术提供了一种蛋白标签的模块化设计方法，并获得了两种分别将外源蛋白严格定位于胞质、核质当中的蛋白标签，该方法及两种多肽标签，可以将不同的功能蛋白定位于胞质、或协助其转运到核质当中，可有效提高功能蛋白的靶标能力，有望应用于生物技术、生物医药等领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术中的标签蛋白，具体涉及一种用于在体外的哺乳动物细胞内定位的胞质、核质定位多肽。

技术介绍

1、在后基因组时代的生物学研究当中，蛋白的功能分析是体外实验的重要方面。实现重组蛋白快速、方便、经济的表达便成为了前提条件。目前常用的蛋白表达体系包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞与哺乳动物细胞系统等。

2、在异源表达的过程当中，常常需要对目的蛋白的表达情况进行检测，因此需要采用一系列的蛋白标签进行标记、辅助。蛋白表达标签在促进蛋白表达、协助蛋白检测、实现蛋白纯化等过程中具有至关重要的作用。例如，将编码目的蛋白的基因与荧光蛋白(egfp、ecfp、eyfp)编码基因进行拼接后，可直接通过荧光显微镜在细胞活体状态下实时观察目的蛋白在细胞中的亚细胞定位和表达情况；例如，将目的基因与gst、trxa等大分子标签进行连接后，能够促进目的蛋白的可溶性，促进蛋白正确折叠，提高稳定性，并提高蛋白的表达量；例如，6*his、flag和c-myc等小分子标签，则可提供简便有效的目的蛋白纯化途径与检测鉴定。

3、以哺乳动物细胞为例，真核细胞内包细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于在体外的哺乳动物细胞内定位的胞质、核质定位多肽，其特征在于：包括两条多肽作为标签，分别命名为RfA1-(MN+M1*5)与RfA1-(M1*3+L2*2)，前者保留RfA1所有的天然连接片段，将除了Rf-MN以外的所有基序替换为Rf-M1，后者采用3段Rf-M1模块与2段Rf-L2模块，构建了一种不同于模板RfA1的整齐、规律的嵌段结构；RfA1-(MN+M1*5)与RfA1-(M1*3+L2*2)序列采用化学合成的方法合成；

2.根据权利要求1所述的一种用于在体外的哺乳动物细胞内定位的胞质、核质定位多肽，其特征在于：所述的将外源蛋白连接在RfA1-(MN+M1*...

【技术特征摘要】

1.一种用于在体外的哺乳动物细胞内定位的胞质、核质定位多肽，其特征在于：包括两条多肽作为标签，分别命名为rfa1-(mn+m1*5)与rfa1-(m1*3+l2*2)，前者保留rfa1所有的天然连接片段，将除了rf-mn以外的所有基序替换为rf-m1，后者采用3段rf-m1模块与2段rf-l2模块，构建了一种不同于模板rfa1的整齐、规律的嵌段结构；rfa1-(mn+m1*5)与rfa1-(m1*3+l2*2)序列采用化学合成的方法合成；

2.根据权利要求1所述的一种用于在体外的哺乳动物细胞内定位的胞质、核质定位多肽，其特征在于：所述的将外源蛋白连接在rfa1-(mn+m1*5)与rfa1-(m...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋俊祎，胡碧茹，叶宗煌，梁超，曾玲，
申请(专利权)人：中国人民解放军国防科技大学，
类型：发明
国别省市：