测定炎症模型中花生四烯酸代谢通路COX-2代谢产物含量的方法技术

本发明专利技术涉及测定炎症模型中花生四烯酸代谢通路COX‑2代谢产物含量的方法，包括以下步骤：(1)对样本前处理：对细胞上清液样本和/或血清样本进行前处理，前处理的过程中加入内标工作液，内标工作液为PGA<subgt;2</subgt;‑D<subgt;4</subgt;溶液；(2)采用Agilent 6495三重四极杆质谱仪检测处理后的样本。本发明专利技术提供的方法可以同时检测AA代谢通路中11种代谢产物的含量，具有快速、灵敏度高、稳定性好等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于检测，尤其涉及测定炎症模型中花生四烯酸代谢通路cox-2代谢产物含量的方法。

技术介绍

1、花生四烯酸(arachidonic acid，aa)是一种ω-6多不饱和脂肪酸，为体内分布最广泛的内源性活性物质，在维持机体细胞膜的结构与功能等方面具有重要的作用。aa不仅是机体各组织和器官中必不可少的磷脂，同时还是人体前列腺素(pg)合成的重要前体物质，在aa代谢网络中，aa分别通过环氧合酶(cyclooxygenases，coxs)、脂氧合酶(lipoxygenase，loxs)和细胞色素p450(cytochromep450，cyp450)酶三种代谢途径分别产生了前列腺素类(prostaglandins，pgs)、血栓素类(thromboxanes，txs)、白三烯类(leucotrienes，lts)或羟基脂肪酸等一系列代谢产物，引发不同的炎症反应。前列腺素类包括前列腺素f2β(pgf2β)、前列腺素e2(pge2)、前列腺素e1(pge1)、前列腺素d1(pgd1)、前列腺素d2(pgd2)、前列腺素a1(pga1)、前列腺素a2(pga2)本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.测定炎症模型中花生四烯酸代谢通路COX-2代谢产物含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，检测条件包括：在WatersAcquity UPLC C18柱上进行色谱分离；流动相为0.1％甲酸A和乙腈B，梯度洗脱：40％B为0-3分钟，40％-80％B为3-8分钟，40％B为8.01-10分钟；注射等量5μL，FLOW速度为300μL/min；使用MRM和ESI源在负离子模式下对代谢产物进行检测；干燥气体流量为11.0L/min，干燥气体温度为300℃，雾化器15psig，毛细管电压为4000V。>

3.根据权利...

【技术特征摘要】

1.测定炎症模型中花生四烯酸代谢通路cox-2代谢产物含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，检测条件包括：在watersacquity uplc c18柱上进行色谱分离；流动相为0.1％甲酸a和乙腈b，梯度洗脱：40％b为0-3分钟，40％-80％b为3-8分钟，40％b为8.01-10分钟；注射等量5μl，flow速度为300μl/min；使用mrm和esi源在负离子模式下对代谢产物进行检测；干燥气体流量为11.0l/min，干燥气体温度为300℃，雾化器15psig，毛细管电压为4000v。

3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，步骤(1)中，细胞上清液样本进行前处理的方法包括以下步骤：取上清液200μl，加入内标工作液50μl，加入乙腈800μl，涡旋3min；4℃，14000rpm离心10min，取上清；真空浓缩；加入色谱甲醇100μl重新溶解，静置后超声，涡旋3min；4℃，14000rpm离心10min，取上清。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，细胞上清液为经lps诱导的raw264.7细胞炎症模型的上清液。

5.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，步骤(1)中，取血清200μl，加入内标工作液50μl，加入乙腈800μl，涡旋3min；4℃，14000rpm离心10min，取上清；真空浓缩；加入色谱甲醇100μl重新溶解，静置后超声，涡旋3min；4℃，14000rpm离心10min，取上清。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，血清样本为佐剂型诱导关节炎模型的血清样本或ⅱ型胶原诱导关节炎模型的血清样本。

7.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，步骤(2)中，根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：何凡，黄虞枫，汪梦贤，
申请(专利权)人：广东省中医院广州中医药大学第二附属医院，广州中医药大学第二临床医学院，广东省中医药科学院，
类型：发明
国别省市：