一种简单高效的DNA-蛋白质定向偶联模型的构建方法技术

本发明专利技术属于化学生物学和药物化学领域，涉及一种简单高效的DNA‑蛋白质定向偶联模型的构建方法。包括：步骤1：将赖氨酸结构类似物定向安装到野生型蛋白质突变得到的半胱氨酸位点上；该野生型蛋白质不含有半胱氨酸或其突变不影响功能，并含有可与DNA形成水解可逆席夫碱型DNA‑蛋白质共价偶联（DPC）的赖氨酸残基；所述半胱氨酸由赖氨酸突变获得。步骤2：将寡核苷酸与步骤1产物通过肟化偶联得到内源性DPC结构类似物。本发明专利技术在温和条件下实现了蛋白质的位点选择性赖氨酸结构类似物功能化，构建了水解稳定且与内源性DPC化学结构高度类似的定向偶联模型。该方法步骤简单、反应快速，有助于提高实验效率，减少对实验设备和操作的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化学生物学和药物化学领域，具体涉及一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法。

技术介绍

1、dna损伤与疾病有着密切的关系。dna双螺旋结构中的杂环碱基序列构成了驱动所有生物体运作的遗传密码，编码序列的正确性和稳定性对于细胞中功能性mrna和蛋白质的表达是至关重要的。而细胞会受到多种环境因素的影响，各种内源性和外源性的威胁对细胞中dna造成不可逆转的损伤，进而导致癌症、神经退行性疾病和自身免疫疾病等疾病的发生。

2、dna-蛋白质的共价偶联产物(dna-protein cross-links,dpcs)是一类结构复杂且特殊的dna损伤，具有高度异质性，不同类型的dpc根据dna的结构，蛋白质的种类以及化学结合的方式不同而各有所异。

3、在染色质结构中，拥有约145个碱基对的dna缠绕在由组蛋白h2a、h2b、h3和h4组成的八聚体上，形成核小体。组蛋白n端尾部具有大量赖氨酸，易与多种内源性含醛基的dna结构发生反应，形成水解可逆但半衰期相对较长的schiff碱型dna-组蛋白共价偶联体(dhcs)。目前，对于本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种简单高效的DNA-蛋白质定向偶联模型的构建方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种简单高效的DNA-蛋白质定向偶联模型的构建方法，其特征在于，步骤1具体包括以下内容：

3.根据权利要求2所述的一种简单高效的DNA-蛋白质定向偶联模型的构建方法，其特征在于，步骤1.1中，采用二硫苏糖醇和2,5-二溴己二酰胺分别对野生型蛋白质突变后的半胱氨酸的侧链基团-CH2-CH2-SH进行还原和转化。

4.根据权利要求3所述的一种简单高效的DNA-蛋白质定向偶联模型的构建方法，其特征在于，采用二硫苏糖醇进行还原时，二硫苏糖醇用量为100当量，在室...

【技术特征摘要】

1.一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法，其特征在于，步骤1具体包括以下内容：

3.根据权利要求2所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法，其特征在于，步骤1.1中，采用二硫苏糖醇和2,5-二溴己二酰胺分别对野生型蛋白质突变后的半胱氨酸的侧链基团-ch2-ch2-sh进行还原和转化。

4.根据权利要求3所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法，其特征在于，采用二硫苏糖醇进行还原时，二硫苏糖醇用量为100当量，在室温下振荡反应4小时；采用2,5-二溴己二酰胺进行转化时，2,5-二溴己二酰胺用量为100当量，37℃振荡反应4小时。

5.根据权利要求2所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法，其特征在于，步骤1.2的催化反应中，bpin、邻苯二酚、ru(bpm)3 cl2的用量分别为100...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳雪，杨昆，彭莹，王之朔，魏晓滢，陈俊阳，张守涛，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：