一种用于检测柑橘木虱的PCR引物及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测柑橘木虱的PCR引物及其检测方法。包括DcF1引物和/或DcF2引物；所述的DcF1引物包括：DcF1:5’‑GTGGAGGAACACAGCACGTTAGGAA‑3’和DcR1:5’‑TGCAGACGCAGCTGAGATTTCTGAG‑3’；所述的DcF2引物包括：DcF2:5’‑GTAT CACCATGCACTGCA‑3’和DcR2:5’‑ATATGTGGCTTCACCCCT‑3’。本专利通过比对柑橘木虱基因组与其他昆虫基因组，挑选柑橘木虱基因组特有孤儿基因，设计巢式PCR引物，利用内外引物退火温度差，构建单管巢式PCR反应体系，增加灵敏度的同时，减低了非特异性与污染造成的假阳性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于害虫防治领域，具体涉及一种用于检测柑橘木虱的pcr引物及其检测方法。

技术介绍

1、柑橘木虱(diaphorina citri)是橘果园黄龙病(citrus huanglongbing，hlb)传播蔓延最重要的途径。柑橘木虱是半翅目木虱科昆虫，柑橘木虱在中国各省柑橘产区均有分布，成虫分散在叶片背面叶脉和嫩芽上取食并栖息。卵产于嫩芽缝隙或幼嫩叶片上。主要以成虫和若虫为害寄主作物的嫩芽和新稍。成、若虫刺吸嫩芽、幼叶和嫩稍汁液，被害的嫩芽和新稍干枯萎缩，新叶扭曲畸形，排泄物诱发烟煤病。因此，其在芸香科植物上的活动会残留大量dna，一般称为环境dna。收集并检测其残留的环境dna，可以追踪柑橘木虱dna的活动轨迹，判断柑橘木虱的防控效果，预测柑橘木虱种群动态与消长。

技术实现思路

1、本专利技术的目的是根据生物信息预测的物种独有基因(孤儿基因)设计pcr引物，提供一种特异性好、灵敏度高、操作简单的用于检测柑橘木虱的pcr引物，以及柑橘木虱单管巢式pcr检测方法。

2、另一方面，本专利技术的柑本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测柑橘木虱的PCR引物，其特征在于，包括DcF1引物和/或DcF2引物；

2.一种用于检测柑橘木虱的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的PCR引物。

3.一种用于检测柑橘木虱的方法，其特征在于，是采集待测昆虫或者柑橘木虱生境中的环境DNA，然后用权利要求1中的DcF1引物或DcF2引物或它们的组合进行PCR扩增，电泳检测待测引物，DcF1引物扩增的产物在527bp处，DcF2引物扩增的产物在285bp处，DcF1引物和DcF2引物扩增的产物在285bp处。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，当利用DcF1引物扩增时，其反应程序...

【技术特征摘要】

1.一种用于检测柑橘木虱的pcr引物，其特征在于，包括dcf1引物和/或dcf2引物；

2.一种用于检测柑橘木虱的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的pcr引物。

3.一种用于检测柑橘木虱的方法，其特征在于，是采集待测昆虫或者柑橘木虱生境中的环境dna，然后用权利要求1中的dcf1引物或dcf2引物或它们的组合进行pcr扩增，电泳检测待测引物，dcf1引物扩增的产物在527bp处，dcf2引物扩增的产物在285bp处，dcf1引物和dcf2引物扩增的产物在285bp处。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，当利用dcf1引物扩增时，其反应程序是95℃预变性3min，95℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环，72℃延伸7min。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，当利用dcf2引物扩增时，其反应程序是95℃预变性3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈大嵩，张胜强，段海涛，欧阳革成，孟翔，
申请(专利权)人：广东省科学院动物研究所，
类型：发明
国别省市：