System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 冠状病毒的检测方法及试剂盒技术_技高网

冠状病毒的检测方法及试剂盒技术

技术编号:43579344 阅读:23 留言:0更新日期:2024-12-06 17:45
本发明专利技术涉及冠状病毒检测技术领域,特别涉及冠状病毒的检测方法及试剂盒,包括以下步骤,对样品进行采集,并将采集到的样品进行统一存储,提取待检测样本的RNA,加入反向转录酶进行体外反转录合成cDNA,加入DNA聚合酶及RNA聚合酶进行扩增及再转录,加入核酸酶,核酸酶指导RNA,RNA荧光探针及缓冲液进行反应,获得荧光反应产物,使用荧光读板仪检测反应产物。冠状病毒RNA在体外进行反向转录,扩增及再转录,以实现RNA到RNA的靶向分子扩增,再通过Cas13a序列介导的特异性核酸酶Cas13a激活而发生RNA荧光探针的剪切,从而检测出荧光。具有操作简单、灵敏性高、特异性强、不需要PCR扩增条件、稳定性好、经济实用等优点,能够满足临床快速诊断与筛查的需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及冠状病毒检测,特别涉及冠状病毒的检测方法及试剂盒


技术介绍

1、冠状病毒(coronavi ruses,covs)属于冠状病毒科,是自然界广泛存在、能够感染人和动物的一大类病毒家族,在电镜下观察其病毒粒子表面有类似日冕状的纤突而被命名。冠状病毒的基因组较大,其单股正链基因序列长达26~32kb,是已知自然界序列最长的rna病毒。由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severeacuterespiratorysyndromecoronavi rus2,sars-cov-2)引起的持续流行性新型冠状病毒感染(coronavi rusd i sease2019,covid-19)疫情最初爆发于2019年12月下旬,如今对全球公共卫生和经济构成了前所未有的威胁。

2、目前,对新型冠状病毒的病毒性疾病的病原诊断主要由基因扩增法(如恒温扩增法、qpcr法),基因测序法,抗体检测法(免疫发光法等)等,其中,以qpcr法最为常用,灵敏度也高。但是,使用qpcr法对2019-ncov等新型冠状病毒的检测需要严格的pcr扩增实验室,且qpcr法存在一定的假阴性的缺陷。此外,基因测序法虽然检测结果较为可靠,但不能用于快速筛查或检测。抗体检测法需要在病人产生足够免疫反应后才能检测到,并存在检测结果特异性不高的缺陷。

3、因此,有必要提供冠状病毒的检测方法及试剂盒解决上述技术问题。


技术实现思路

1、为解决上述技术问题,本专利技术提供冠状病毒的检测方法及试剂盒。

2、本专利技术提供的冠状病毒的检测方法,包括以下步骤:

3、s1、对样品进行采集,并将采集到的样品进行统一存储;

4、s2、提取待检测样本的rna,加入反向转录酶进行体外反转录合成cdna;

5、s3、加入dna聚合酶及rna聚合酶进行扩增及再转录;

6、s4、加入核酸酶,核酸酶指导rna,rna荧光探针及缓冲液进行反应,获得荧光反应产物;

7、s5、使用荧光读板仪检测反应产物,以获得对带有特定基因序列的rna检测结果,并对结果进行判定。

8、优选的,所述s1中样品采集中的样品即待测样本,其来源包括,人鼻咽拭子、唾液、痰液样本、肺泡灌洗液样本、血液样本、下呼吸道分泌物、粪便样本或环境样本。

9、优选的,所述s3中rna聚合酶选用t7rna聚合酶,所述s4中核酸酶选用核酸酶cas13a,所述rna荧光探针的5’端连接荧光报告基团,3’端连接荧光淬灭基团。

10、优选的,所述荧光报告基团选自fam、hex、rox或cy5中的任意一种,所述荧光淬灭基团选自bhq1或bhq2中的任意一种。

11、优选的,所述s5中荧光读板仪使用96孔板或者384孔板。

12、冠状病毒的试剂盒,包括检测用具和试剂。

13、所述检测用具包括,使用说明书,棉签,支架,试剂瓶,试纸;

14、所述试剂包括,核酸酶cas13a,用于特异性检测基因序列的cas13a指导rna,rna荧光探针,反向转录酶,dna聚合酶,t7rna聚合酶以及缓冲液。

15、优选的,所述反向转录酶包含由能被t7rna聚合酶识别并转录的序列以及靶向病毒rna互补序列组成的反向引物。

16、与相关技术相比较,本专利技术提供的冠状病毒的检测方法及试剂盒具有如下

17、有益效果:

18、本专利技术通过上述检测方法,冠状病毒rna在体外进行反向转录,扩增及再转录,以实现rna到rna的靶向分子扩增,再通过cas13a序列介导的特异性核酸酶cas13a激活而发生rna荧光探针的剪切,从而检测出荧光。通过本专利技术能够对sars-cov-1及sars-cov-2冠状病毒的特异性检测,具有操作简单、灵敏性高、特异性强、不需要pcr扩增条件、稳定性好、经济实用等优点,能够满足临床快速诊断与筛查的需求。

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【技术保护点】

1.冠状病毒的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的冠状病毒的检测方法,其特征在于,所述S1中样品采集中的样品即待测样本,其来源包括,人鼻咽拭子、唾液、痰液样本、肺泡灌洗液样本、血液样本、下呼吸道分泌物、粪便样本或环境样本。

3.根据权利要求1所述的冠状病毒的检测方法,其特征在于,所述S3中RNA聚合酶选用T7RNA聚合酶,所述S4中核酸酶选用核酸酶Cas13a,所述RNA荧光探针的5’端连接荧光报告基团,3’端连接荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的冠状病毒的检测方法,其特征在于,所述荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX或CY5中的任意一种,所述荧光淬灭基团选自BHQ1或BHQ2中的任意一种。

5.根据权利要求1所述的冠状病毒的检测方法,其特征在于,所述S5中荧光读板仪使用96孔板或者384孔板。

6.冠状病毒的试剂盒,其特征在于,包括,核酸酶Cas13a,用于特异性检测基因序列的Cas13a指导RNA、RNA荧光探针、反向转录酶、DNA聚合酶,T7RNA聚合酶与缓冲液。

7.根据权利要求6所述的冠状病毒的试剂盒,其特征在于,还包括检测用具,所述检测用具包括使用说明书、棉签、支架、试剂瓶与试纸。

8.根据权利要求6所述的冠状病毒的试剂盒,其特征在于,所述反向转录酶包含由能被T7RNA聚合酶识别并转录的序列以及靶向病毒RNA互补序列组成的反向引物。

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【技术特征摘要】

1.冠状病毒的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的冠状病毒的检测方法,其特征在于,所述s1中样品采集中的样品即待测样本,其来源包括,人鼻咽拭子、唾液、痰液样本、肺泡灌洗液样本、血液样本、下呼吸道分泌物、粪便样本或环境样本。

3.根据权利要求1所述的冠状病毒的检测方法,其特征在于,所述s3中rna聚合酶选用t7rna聚合酶,所述s4中核酸酶选用核酸酶cas13a,所述rna荧光探针的5’端连接荧光报告基团,3’端连接荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的冠状病毒的检测方法,其特征在于,所述荧光报告基团选自fam、hex、rox或cy5中的任意一种,所述荧光淬灭基团选自bh...

【专利技术属性】
技术研发人员:李晓宁
申请(专利权)人:重庆医科大学
类型:发明
国别省市:

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