一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，包括S1、将受精后的斑马鱼吸至容器内，放入冰箱中低温麻醉；S2、吸出容器内的多余液体，然后加入A溶液对斑马鱼进行固定；S3、弃去用于固定的A溶液，再加入B溶液后放入冰箱进行脱水；S4、吸出液体弃去，加入C溶液进行染色；S5、吸出液体弃去，加入B溶液进行清洗；S6、吸出液体弃去，加入D溶液进行漂白；S7、吸出液体弃去，加入E溶液；S8、加入F溶液进行稀释；S9、吸出液体弃去，加入G溶液；S10、放置显微镜下拍照。本发明专利技术可快速、简便、直观、效果好的完成对斑马鱼软骨的染色。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体为一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法。

技术介绍

1、斑马鱼也被称为蓝条鱼、花条鱼或斑马担尼鱼，是鲤形目鲤科短担尼鱼属的一种鱼类，其具有体积小、繁殖量大、骨骼发育迅速、良好的光学透明性、与人类基因高度同源(相似性高于85％)等特点。正被广泛的应用于多种科学研究，如利用斑马鱼研究生命科学的基础问题，揭示胚胎和组织器官发育的分子机理；利用斑马鱼构建人类的各种疾病和肿瘤模型，建立药物筛选和治疗的研究平台。另外，斑马鱼尤其是在骨骼相关疾病的生物模型中，具有显著的优势和广泛的应用。

2、在对斑马鱼的骨骼进行研究时，需要对对斑马鱼的软骨进行染色。阿尔新蓝(alcian)属于阳离子染料，是一种类铜钛花青共轭染料，可以与组织中的阴离子基团如羧基和硫酸根结合形成不溶性复合物，具体来说，其与斑马鱼软骨中的酸性粘液物质发生反应，形成不溶于水的蓝色沉淀，从而使得软骨结构在显微镜下呈现出蓝色。

3、目前，已知的斑马鱼阿尔新蓝染色方法耗时长、步骤繁琐，溶液种类多且配置复杂，尤其是斑马鱼肌肉及内脏组织遮挡，导致显微镜下斑马鱼颅面软骨显色较差；本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，在S1中，选用的斑马鱼为受精后9天的斑马鱼，容器为六孔板；低温麻醉的温度为4℃，时间为4-8min，麻醉后以当斑马鱼漂浮于溶液中且形态笔直为优。

3.根据权利要求2所述的一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，在S2中，A溶液为4％多聚甲醛溶液，固定的时间为12-15h，固定后以斑马鱼沉于容器底为优。

4.根据权利要求3所述的一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，在S3和S5中，B溶液均为75％无水乙醇溶液，B溶...

【技术特征摘要】

1.一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，在s1中，选用的斑马鱼为受精后9天的斑马鱼，容器为六孔板；低温麻醉的温度为4℃，时间为4-8min，麻醉后以当斑马鱼漂浮于溶液中且形态笔直为优。

3.根据权利要求2所述的一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，在s2中，a溶液为4％多聚甲醛溶液，固定的时间为12-15h，固定后以斑马鱼沉于容器底为优。

4.根据权利要求3所述的一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，在s3和s5中，b溶液均为75％无水乙醇溶液，b溶液的配置方法为：将75ml100％无水乙醇加入纯水定容至100ml；且在s3中，脱水的温度为4℃，时间为15-20min。

5.根据权利要求4所述的一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，在s4中，c溶液为酸性阿利新蓝染液，c溶液的配置方法为：在32ml甲醇和8ml乙酸组成的混合溶液中加入0.04g阿利新蓝粉末；并且将整个容器放置在摇床上震荡进行染色，染色的时间不少于12h。

6.根据权利要求5所述的一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，在s5中，清洗的方法为：在摇床上震荡清洗2h。

7.根据权利要求6所述的一种斑马鱼阿利新蓝软骨染色方法，其特征在于，在s6中，d溶液为3％h2o2和2％koh混...

【专利技术属性】
技术研发人员：段鹏，李新宇，石义华，周卫兵，张颖，黄娇龙，喻会，王普清，朱紫潞，
申请(专利权)人：湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：