一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体、新型宿主菌及其应用制造技术

本发明专利技术的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体、新型宿主菌及其应用，属于人血清白蛋白制备的生物技术领域。通过目的基因的优化设计、构建含高拷贝数外源基因及高表达水平的毕赤酵母工程菌及中试发酵工艺的优化等，使基因重组人血清白蛋白的表达水平达到25.82g/L的超高水平；重组人血清白蛋白的纯化工艺仅使用发酵液预处理和三步柱层析，目的蛋白纯度已达到99％以上，整个纯化工艺的回收率达到60％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于利用基因工程技术制备人血清白蛋白的生物，具体来说是一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体、新型宿主菌及其应用。

技术介绍

1、分子生物学技术的发展为利用生物反应器生产外源蛋白提供了许多方法和手段。到目前为止，已发展出了大肠杆菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等多种外源蛋白表达系统。巴斯德毕赤酵母(pichia.pastoris)基因表达系统经过近三十年发展，已成为目前表达外源蛋白的最重要宿主之一，如宿主菌gs115(cregg，et al(2009).methods enzymol.463，169–189；us patent4，879，231，phillips petroleum，1989)。该系统具有易于高密度发酵，目的基因稳定整合在宿主基因组，能使表达产物有效分泌并适度糖基化，培养基价廉经济等特点。该基因表达系统利用了高效可调控启动子aox1，已高效表达了hbsag、tnf、egf、破伤风毒素c片段、基因工程抗体等数千种外源蛋白，证实该系统为高效、实用、简便，以及提高表达量并保持产物生物学活性为突出特征的外源基因表达系统，而且非常适宜于中本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含：

3.根据权利要求2所述的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于：还包括

4.根据权利要求2所述的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为pPIC9、pPIC3、pPICZαABC、pPIC3.5K、pHIL-S1、pHIL-D2、pA0804、pA0815、pGAPZαABC...

【技术特征摘要】

1.一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体的核苷酸序列如seq id no：1所示。

2.根据权利要求1所述的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含：

3.根据权利要求2所述的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于：还包括

4.根据权利要求2所述的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为ppic9、ppic3、ppiczαabc、ppic3.5k、phil-s1、phil-d2、pa0804、pa0815、pgapzαabc、ppic6αabc、ppic9k中的任意一种通过限制性内切酶saci或bglⅱ酶切后的线性化载体。

5.根据权利要求4所述的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为hsa-ppic9k通过限制性内切酶saci或bglⅱ酶切后的线性化载体，其中至少含有一个拷贝的优化设计的编码人血清白蛋白的优化基因。

6.根据权利要求1所述的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组表达载体，其特征在于：所述编码人血清白蛋白的优化基因中，选用巴斯德毕赤酵母醇氧化酶(aox1)基因偏爱的偏爱密码子并控制该基因偏爱密码子占编码的优化基因密码子总数的90％。

7.根据权利要求2所述的一种用于制备高表达人血清白蛋白的重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志敏，
申请(专利权)人：河北华凯惠合生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：