【技术实现步骤摘要】
能够产生人抗体的转基因有蹄动物的制作方法目录专利技术背景........................................................................4专利技术概述........................................................................附图说明.....................................................................45专利技术详述.....................................................................55实施例1HAC的导入和重排.....................................................62插入HAC的程序的概述.......................................................62插入HAC的示例性程序.......................................................64人重链基因座在ΔHAC牛胎儿中重排和表达的证明................................................................72人重链和轻链基因座在ΔΔHAC胎儿中的重排和表达.............................................
【技术保护点】
具有一种或多种编码全部或部分异种免疫球蛋白（Ｉｇ）基因的核酸的转基因有蹄动物，所述基因经历重排并且表达一种以上的异种Ｉｇ蛋白。
【技术特征摘要】
US 2002-5-17 60/381,531;US 2002-11-8 60/425,0561.具有一种或多种编码全部或部分异种免疫球蛋白(Ig)基因的核酸的转基因有蹄动物，所述基因经历重排并且表达一种以上的异种Ig蛋白。2.权利要求1的有蹄动物，其中所述异种Ig蛋白是人Ig蛋白。3.权利要求1的有蹄动物，其中所述核酸包含在染色体片段中。4.权利要求3的有蹄动物，其中所述染色体片段是ΔHAC或ΔΔHAC。5.权利要求1的有蹄动物，其中所述有蹄动物是牛、绵羊、猪、或山羊。6.具有减少功能性内源抗体表达的突变的转基因有蹄动物，其中所述突变包括将转录终止序列插入内源免疫球蛋白核酸。7.权利要求6的有蹄动物，其中所述突变减少了功能性IgM重链的表达或减少了功能性Ig轻链的表达。8.权利要求6的有蹄动物，其中所述突变基本去除了功能性内源抗体的表达。9.权利要求6的有蹄动物，其中所述突变是半合型的。10.权利要求6的有蹄动物，其中所述突变是纯合型的。11.权利要求6的有蹄动物，其中所述突变进一步包括将阳性选择标记插入内源免疫球蛋白基因。12.权利要求11的有蹄动物，其中所述阳性选择标记是抗生素抗性基因。13.权利要求11的有蹄动物，其中所述阳性选择标记与异种启动子可操作性连接。14.权利要求10的有蹄动物，其中每个等位基因包括相同的抗生素抗性基因。15.权利要求10的有蹄动物，其中每个等位基因包括不同的抗生素抗性基因。16.权利要求6的有蹄动物，其中所述转录终止序列插入内源μ重链核酸的外显子2的起始ATG密码子的下游。17.权利要求6的有蹄动物，具有一种或多种包含一个或多个转基因的核酸，并且表达由所述转基因编码的mRNA或蛋白。18.权利要求6的有蹄动物，具有一种或多种包含全部或部分异种免疫球蛋白(Ig)基因的核酸，所述基因经历重排并且表达一种以上的异种Ig分子。19.权利要求18的有蹄动物，表达异种抗体蛋白。20.权利要求19的有蹄动物，其中所述异种抗体蛋白是人抗体蛋白。21.权利要求6的有蹄动物，其中所述有蹄动物是牛、绵羊、猪、或山羊。22.一种有蹄动物体细胞，包含一种或多种编码全部或部分异种免Ig基因的核酸，其中所述基因能够在B细胞中经历重排并且表达一种或多种异种Ig蛋白。23.权利要求22的细胞，其中所述核酸编码异种抗体。24.权利要求22的细胞，其中所述核酸包含在染色体片段中。25.权利要求22的细胞，其中所述细胞是胎儿成纤维细胞或B细胞。26.权利要求22的细胞，其中所述有蹄动物是牛、绵羊、猪、或山羊。27.一种有蹄动物体细胞，包含编码Ig重和/或轻链的核酸中的突变，其中所述突变包括将转录终止序列插入所述核酸。28.权利要求27的细胞，包含所述IgM重链或所述轻链中的两个等位基因中的突变。29.权利要求27的细胞，进一步包含一种或多种编码全部或部分异种Ig基因的核酸，其中所述基因能够在B细胞中经历重排并且表达一种或多种异种Ig分子。30.权利要求27的细胞，其中所述细胞是胎儿成纤维细胞或B细胞。31.权利要求27的细胞，其中所述有蹄动物是牛、绵羊、猪、或山羊。32.由权利要求25或30的B细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤。33.一种产生抗体的方法，所述方法包括以下步骤(a)给具有编码异种抗体基因座的有蹄动物施用一种或多种感兴趣的抗原，其中所述基因座中的核酸节段经历了重排，导致所述抗原的特异性抗体蛋白的产生；和(b)从有蹄动物回收所述抗体。34.权利要求33的方法，其中所述有蹄动物具有减少内源抗体表达的突变，其中所述突变包括将转录终止序列插入内源免疫球蛋白核酸。35.权利要求34的方法，其中转录终止序列插入内源μ重链核酸的外显子2的起始ATG密码子的下游。36.权利要求33的方法，其中所述核酸包含在染色体片段内。37.权利要求33的方法，其中所述核酸是人类核酸。38.权利要求33的方法，其中所述有蹄动物是牛、绵羊、猪、或山羊。39.一种产生抗体的方法，所述方法包括从具有编码异种抗体基因座的有蹄动物回收异种抗体，其中所述基因座中的核酸节段经历了重排，导致一种或多种异种抗体蛋白的产生。40.权利要求39的方法，其中所述有蹄动物具有减少内源抗体表达的突变，其中所述突变包括将转录终止序列插入内源免疫球蛋白核酸。41.权利要求39的方法，其中所述核酸包含在染色体片段内。42.权利要求39的方法，其中所述有蹄动物是牛、绵羊、猪、或山羊。43.一种产生转基因有蹄动物的方法，所述方法包括以下步骤(a)在允许从透化细胞的细胞核、染色质团或染色体去除因子或从重新编程培养基向细胞核、染色质团或染色体加入因子的条件下在重新编程培养基中孵育权利要求22的透化细胞，从而形成重新编程的细胞；(b)将所述重新编程的细胞插入有核或去核的卵母细胞，从而形成核转移卵母细胞；和(c)在允许所述核转移卵母细胞或由所述核转移卵母细胞形成的胚胎发育成胎儿的条件下将所述核转移卵母细胞或所述胚胎转移到宿主有蹄动物的子宫中。44.权利要求43的方法，其中所述重新编程培养基是细胞提取物。45.权利要求43的方法，其中所述透化细胞的细胞核保持由膜围绕，并且在所述重新编程培养基孵育的过程中，所述细胞核中的染色质不浓缩。46.权利要求43的方法，其中通过在所述重新编程培养基中孵育所述透化细胞而形成染色质团。47.权利要求43的方法，其中在允许所述重新编程的细胞的细胞膜重新封闭的条件下孵育所述重新编程的细胞。48.权利要求43的方法，其中在插入所述核转移卵母细胞前从所述重新编程培养基纯化所述重新编程的细胞。49.权利要求43的方法，其中所述胎儿发育成存活的后代。50.权利要求49的方法，进一步包括将所述后代与内源免疫球蛋白核酸中具有突变的转基因有蹄动物交配，其中所述突变包括将转录终止序列插入内源免疫球蛋白核酸。51.权利要求43的方法，其中在允许细胞分裂的条件下培养来自于步骤(b)的所述核转移卵母细胞，并且得到的细胞之一可以重新克隆一次或多次。52.权利要求43的方法，其中所述透化细胞和所述核转移卵母细胞来自于相同物种。53.一种产生转基因有蹄动物的方法，所述方法包括以下步骤(a)使来自于权利要求22的细胞的供体细胞核在允许形成染色质团的条件下与重新编程培养基接触；(b)将所述染色质团插入卵母细胞，从而形成核转移卵母细胞；和(c)在允许所述核转移卵母细胞或由所述核转移卵母细胞形成的胚胎发育成胎儿的条件下将所述核转移卵母细胞或所述胚胎转移到宿主有蹄动物的子宫中。54.权利要求53的方法，其中所述染色质团在没有DNA复制的条件下形成。55.权利要求53的方法，其中所述重新编程培养基是有丝分裂提取物、去污剂和盐溶液、去污剂溶液、盐溶液、或蛋白激酶溶液。56.权利要求53的方法，其中在插入所述核转移卵母细胞前从所述提取物纯化来自于步骤(a)的所述染色质团。57.权利要求53的方法，其中所述胎儿发育成存活的后代。58.权利要求53的方法，其中在允许细胞分裂的条件下培养来自于步骤(b)的所述核转移卵母细胞，并且得到的细胞之一可以重新克隆一次或多次。59.权利要求53的方法，其中所述供体细胞核和所述核转移卵母细胞来自于相同物种。60.权利要求53的方法，其中所述供体细胞核是二倍体。61.权利要求43或53的方法，其中所述供体细胞核来自于成纤维细胞、上皮细胞、神经细胞、表皮细胞、角质细胞、造血细胞、黑色素细胞、软骨细胞、B淋巴细胞、红细胞、巨噬细胞、单核细胞、成纤维细胞、肌肉细胞、胚胎干细胞、胚胎生殖细胞、胎儿细胞、胎盘细胞、雌性生殖系统细胞、或胚胎细胞。62.权利要求61的方法，其中所述细胞是胎儿成纤维细胞。63.一种产生转基因有蹄动物的方法，所述方法包括以下步骤(a)将权利要求22的细胞、所述细胞的细胞核或所述细胞的染色质团插入卵母细胞，从而形成第一胚胎；(b)使来自所述第一胚胎的一个或多个细胞与来自第二胚胎的一个或多个细胞相接触，从而形成第三胚胎；其中所述第二胚胎是体外受精的胚胎、天然存在的胚胎或孤雌生殖活化的胚胎，并且其中所述第一胚胎和所述第二胚胎的至少一个是紧密胚胎；和(c)将所述第三胚胎在允许所述第三胚胎发育成胎儿的条件下转移到宿主有蹄动物的子宫中。64.一种产生转基因有蹄动物的方法，所述方法包括以下步骤(a)将权利要求22的细胞、所述细胞的细胞核或所述细胞的染色质团插入卵母细胞，从而形成第一胚胎；(b)使来自所述第一胚胎的一个或多个细胞与来自第二胚胎的一个或多个细胞相接触，从而形成第三胚胎；其中所述第二胚胎是体外受精的胚胎、天然存在的胚胎或孤雌生殖活化的胚胎，并且其中所述第一胚胎和所述第二胚胎处于不同的细胞期；和(c)将所述第三胚胎在允许所述第三胚胎发育成胎儿的条件下转移到宿主有蹄动物的子宫中。65.一种产生转基因有蹄动物的方法，所述方法包括以下步骤(a)在允许形成染色质团的条件下使来自于权利要求22的细胞的供体细胞核与重新编程培养基接触；(b)将所述染色质团插入卵母细胞，从而形成第一胚胎；(c)使来自所述第一胚胎的一个或多个细胞与来自第二胚胎的一个或多个细胞相接触，从而形成第三胚胎；其中所述第二胚胎是体外受精的胚胎、天然存在的胚胎或孤雌生殖活化的胚...
【专利技术属性】
技术研发人员：JM罗布尔，P科拉斯，E沙利文，P卡西纳坦，RA戈德斯比，义巳黑岩，一磨富塚，功石田，
申请(专利权)人：赫马技术有限公司，麒麟麦酒株式会社，
类型：发明
国别省市：US[美国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。